姓名：宋亚飞学号：159310006 专业：养殖（专硕） 1 通常植物组织培养所用培养基构成要素包括哪些？ 2 植物组织培养中常用的消毒剂，请列举4个以上。 3 植物组织培养一般需要注意哪些培养条件。 1答：1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种氮源通常有硝态氮或铵态氮但在培养基中用硝态氮的较多也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子在近代的培养基中其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁 这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要有的是参与某些生物过程的调节。培养基中的铁离子大多以螯合铁的形式存在即FeSO4与Na2—EDTA螯合剂的混合。 2.碳源培养的植物组织或细胞它们的光合作用较弱。因此需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖用量通常为2-4高者可达5亦可用市售的白糖所代替但一般应增加用量而且最好用比较固定的厂家生产的产品以保证实验的稳定性。 3.有机营养成分包括人工合成或天然的有机附加物包括维生素氨基酸及其它有机物质等。最常用的有酪朊水解物水解乳蛋白、水解酪蛋白CH、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁CM及各种氨基酸如甘氨酸氨基乙酸等。维生素在培养基中加入维生素常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素其中效果最佳的有硫氨素组织培养中使用的赤霉素只有一种即赤霉酸GA3。虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究但在培养基中很少添加因为它的作用往往是负面的。乙烯等。 5.琼脂或其他支持物 除液体悬浮培养外就目前情况而言琼脂是一种极为理想的支持物。一般浓度0.4-1质量越差的琼脂用量越大。琼脂作为培养基的支持物使培养基呈固体状态以利于各种外植体的培养。 6.其他添加剂含天然提取物、抗生素等 活性炭 渗透调节剂 抗生素 抗氧化剂等。 活性炭加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力减少一些有害物质的影响例如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。这在兰花组织培养中效果更明显。另外活性炭使培养基变黑有利于某些植物生根。但活性炭对物质吸附无选择性既吸附有害物质也吸附有利物质因此使用时应慎重考虑不能过量一般用量为1—5。活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应。在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细胞中加入1一4活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。 7.水 水是植物原生质体的组成成分也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水以保持母液及培养基成分的精确性防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水以防成分的变化引起不良效果。 8.pH 培养基的pH因培养材料不同而异大多数植物都要求在pH5.6—5.8的条件下进行组织培养。常用0.1mol/L的Na0H和0.1mol/L的HCl来调节培养基的PH。

2答：外植体在接种之前, 须经严格地灭菌.由于灭菌剂的种类不同, 杀菌力不同, 因此选择消毒剂, 既要考虑具有良好的消毒杀菌作用, 同时又易被蒸馏水冲洗掉或能自行分解的物质, 且不会损伤或只轻微损伤组织材料而不影响生长.在使用不同的药剂时, 需要考虑使用浓度和处理时间.现将常用的消毒剂列于下表 中.

常用消毒剂

其中70%～75%酒精具有较强的杀菌力、穿透力和湿润作用,可排除材料上的空气,利于其他消毒剂的渗入, 因此常与其他消毒剂配合使用.由于酒精穿透力强,应严格掌握好处理时间,时间太长会引起处理材料的损伤.

选择适宜的消毒剂处理时,为使其消毒效果更彻底,有时还需与黏着剂或润湿剂配合使用,使消毒剂能更好地渗入外植体内部,达到理想的消毒效果 3答：1、培养材料的选择，需要选择生长较好的材料

2、植物材料的灭菌，要根据不同的材料来确定，材料允许的话，可以设计实验取得最佳的灭菌处理

3、培养基的配置。要根据不同的材料，不同的物种，选择合适的培养基，最好有一组实验取得。做培养基的过程中注意调剂培养基的PH值，有些高温分解的激素要过滤灭菌等。 4、培养条件的选择，包括光照、温度、湿度等。 5、接种。注意灭菌，最好有超净工作台。

植物组培技术作为生物技术在农林领域的应用，越来越显示出其独特优势，各地陆续建起了各类组培室，而且更多的人想进入，下面就组培培养过程中所需要的条件进行简单介绍： 一、温度： 对大多数植物组织20～28℃即可满足生长所需，其中26～27℃最适合。 二、光： 组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果，有些植物组织在暗处生长较好，而另一些植物组织在光亮处生长较好，但由愈伤组织分化成器官时，则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成，光是决定性因素。

三、渗透压： 渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常1～2个大气压可促进植物组织生长，2个大气压以上时，出现生长障碍，6个大气压时植物组织即无法生存。

四、酸碱度： 一般植物组织生长的最适宜pH为5～6．5。在培养过程中pH可发生变化，加进磷酸氢盐或二氢盐，可起稳定作用。

五、通气： 悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。小量悬浮培养时巨常转动或振荡，可起通气和搅拌作用。大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。