全国艾滋病检测技术规范

2 规范性文件引用 ......................................................................................................... 81 3 HIV-1分离的意义 ...................................................................................................... 81 3.1 HIV抗体不确定或HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断及诊断.................. 81 3.2 HIV表型耐药检测及其他HIV生物学特征的研究。...................................... 81 3.3 HIV 感染的辅助诊断HIV-1感染窗口期。..................................................... 81 4 实验室要求 ................................................................................................................. 81 4.1 实验室................................................................................................................. 81 4.2 设备..................................................................................................................... 81 4.3 材料..................................................................................................................... 81 5 HIV-1分离的方法及程序 .......................................................................................... 82 5.1 样本..................................................................................................................... 82 5.2 靶细胞制备......................................................................................................... 82 5.3 建立共培养......................................................................................................... 82 5.4 监测病毒生长..................................................................................................... 82 5.5 病毒鉴定。......................................................................................................... 82 5.6 判定结果和解释................................................................................................. 82 6 质量控制 ..................................................................................................................... 83

附表1 HIV抗体筛查检测报告 ......................................................................................... 84 附表2 HIV抗体确证检测报告 ......................................................................................... 85 附表3 HIV-1核酸检测报告 ............................................................................................. 86 附表4 HIV抗体确证检测报告（特定条件） ................................................................. 87 附表5 CD4+T淋巴细胞检测报告 ..................................................................................... 88 附表6 HIV-1耐药基因型检测报告 ................................................................................. 89 附表7 婴儿艾滋病感染早期诊断检测报告 .................................................................... 90

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第一章 样品的采集和处理

1 范围

本章规定了用于人免疫缺陷病毒（HIV）检测的全血、血清、血浆、细胞、口腔黏膜渗出液、尿液以及滤纸干血斑（DBS）样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体、抗原、核酸、基因亚型、耐药检测、CD4+和CD8+T淋巴细胞数测定及HIV分离培养。

2 规范性文件引用

《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准 WS -293有效版本。

《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量及保证指南》（中国疾病预防控制中心，2013年版）。

《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南》（中国疾病预防控制中心，2013年版）。

《HIV-1基因型耐药检测及质量保证指南》，（中国疾病预防控制中心，2013年版）。

Consolidated Guidelines on HIV Testing Services. WHO July 2015.

《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，卫生部第45号令,2006年2月1日。

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3 样品种类及相应的用途

3.1 全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品可用于HIV抗体检测。

3.2 全血、血清、血浆、病毒培养上清液可用于HIV抗原检测。 3.3 抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。

3.4 血浆、DBS可用于HIV-1病毒载量、基因型、耐药检测。 3.5 淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（PBMC）及全血可用于HIV核酸定性与定量、基因型检测和HIV-1分离培养。

4 操作步骤 4.1 采样前准备

根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临床采血技术要求操作，遵守生物安全相关要求。检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，是否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致，并注明样品采集时间及唯一编码。采集血液样本宜选择合适的室内（外）采血空间，受检者坐（卧）于合适的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器等。口腔黏膜渗出液样本应使用试剂盒提供的专用采样工具，尿液样本建议使用可保持尿液稳定的专用采尿管。 4.1.1 样品的编码和记录

4.1.2 应制定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品制定唯一性编码（编号），保证其唯一性。

4.1.3 采血前，先对试管或滤纸进行标记，核对后编码。要将标签贴在

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试管的侧面，推荐使用预先印制好的、专门用于冷冻储存的耐低温标签。干血斑滤纸应使用具有资质的产品。

4.1.4 口腔黏膜渗出液样本应采集口腔渗出液,不是唾液。 4.1.5 尿液样本准备好带有唯一编码的采尿管，并保留唯一编码。 4.1.6 应使用专门的样品记录本或登记表记录样品，同时录入电脑保存。

4.2 样品的采集和处理 4.2.1 血液

4.2.1.1 抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂（EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠）的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀6～8次，备用。 4.2.1.2 末梢全血：消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指或食指。1岁以下儿童采用足跟部）。用采血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，备用。

4.2.1.3 血浆：将采集的抗凝全血1500～3000r /min离心15分钟，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。

4.2.1.4 血清：根据需要，用不含抗凝剂的真空采血管抽取5～10ml静脉血，或一次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂的试管中，室温下自然放置1～2小时，待血液凝固、血块收缩后再用1500～3000r/min离心15分钟，吸出血清，置于合适的容器中，备用。

4.2.1.5 淋巴细胞富集液：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15分钟，吸取血浆层下的淋巴细胞富集液，置于合适的容器中，备用。

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4.2.1.6 PBMC：使用淋巴细胞分离液，进行密度梯度离心，吸出PBMC层，置于合适的容器中，备用。

4.2.1.7 抗凝剂的选择：根据检测要求选用适当的抗凝剂，如CD4+和CD8+T淋巴细胞测定可选用EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠；HIV-1病毒分离、核酸定性/定量检测可选用EDTA钠盐或钾盐或枸橼酸钠。 4.2.1.8 样品采集后处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测项目而异，应参见不同检测项目要求。

4.2.1.9 采血完成后的穿刺针头必须丢弃于放置尖锐危险品容器内，妥善处理，防止发生职业暴露。 4.2.2 滤纸干血斑

4.2.2.1 根据需要，可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，用于检测。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑。 4.2.2.2 用移液器从样品管中吸取100μL抗凝全血（或血浆），对准滤纸印圈的中心处，将样品滴在滤纸上，或将穿刺后自皮肤伤口流出的末梢全血直接滴加在滤纸印圈的中心处。

4.2.2.3 根据需要，连续在数个印圈上滴加样品。

4.2.2.4 于室温下自然干燥至少4小时（潮湿气候下至少干燥24小时），不要加热或堆叠血斑，勿与其它界面接触。

4.2.2.5 血斑充分干燥后，将其放入密封袋中，每张干血斑单独保存，避免血斑之间的相互污染，同时放入干燥剂及湿度指示卡，密封包装，保存备用。

4.2.3 尿液和口腔黏膜渗出液

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