液无色后，用30%乙醇、60%乙醇和无水乙醇依次洗脱，每次2-3个柱体积，收集各洗脱液，点聚酰胺薄层板。

(四)芦丁的检识 1．颜色反应（选做）

① α-萘酚-浓硫酸（Molisch）试验：

取芦丁少许置于试管中，加乙醇1ml振摇，加α-萘酚试剂2~3滴振摇，倾斜试管，沿管壁徐徐加入0.5ml浓硫酸，静置，观察两层溶液界面变化，出现紫红色环者为阳性反应，表示试样的分子中含有糖的结构，糖和甙类均呈阳性反应，比较芦丁和槲皮素的不同。

② 盐酸-镁粉试验：

取芦丁少许置于试管中，加5％乙醇2ml，在水浴中加热溶解，滴加浓盐酸2滴，再加镁粉约50mg，即产生剧烈的反应。溶液逐渐由黄色变为红色。

③ 三氯化铁试验

取样品水或乙醇液，加入三氯化铁试剂数滴，观察颜色变化。 ④ 三氯化铝试验：

取芦丁少许置于试管中，加入甲醇1~2ml，在水浴中加热溶解，加1％三氯化铝甲醇试剂2~3滴，呈鲜黄色。以同样方法试验槲皮素。

⑤ 氢氧化钠试验：

取芦丁少许置于试管中，加水2ml振摇，观察试管中有无变化。滴加1％氢氧化钠溶液数滴，振摇使溶解，呈黄色澄清溶液。再加入1％盐酸溶液数滴使呈酸性反应，则溶液由澄清转为浑浊状态。

2．色谱检识

固定相：聚酰胺薄层板

样品：a. 芦丁标准品 b. 三种乙醇洗脱液 ； 展开剂：70%乙醇溶液，加2-3滴冰醋酸； 显色：

a. 可见光下观察色斑，再于紫外灯下观察荧光斑点； b. 喷洒AlCl3乙醇液后观察。

五、实验说明及注意事项

1．本实验采用碱溶酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米略捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除支。pH应严格控制在8-9，不得超过10。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芸香甙水解破坏，使提取率明显下降。酸沉一步pH为3-4，不宜过低，否则会使芸香甙形成盐溶于水，降低了收率。

2．芸香甙的提取方法除了用碱溶酸沉法外，还可利用芸香甙在冷水及沸水中的溶解度不同，采用沸水提取法。又报道将生产工艺改进为95%乙醇回流提取后回收醇得浸膏，然后将粗浸膏经除去脂溶性杂质后，用水洗净，过滤，干燥即得芸香甙，可提高收率6．96%，并降低了成本。因此可根据不同原料采用各种不同方法提取。

3. 实验过程中发生的颜色变化（提取液颜色、萃取液颜色、洗脱液颜色等均应在实验报告中详细记录）

六、思考题

1．本实验提取过程中应注意哪些问题？

2．根据芦丁的性质还可采用何种方法进行提取？简要说明理由。