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14 神经毒气二异丙基氟磷酸（DFP）在一些酶中与丝氨酸的-OH反应生成HF和磷酰酯，1949年E.F.Jansen和同事们所作的化学酶修饰实验中，胰凝乳蛋白酶（Mr=25 000）首先在P标记的DFP中温育，然后用强酸将其水解。最后分离得到的氨基酸组分中每25 000g胰凝乳蛋白酶中有1mol标记的O-磷脂酰。从上述实验可以得到有关活性位点的氨基酸组成的什么信息？

15 乙醇脱氢酶催化各种醇氧化为相应的醛。如果底物浓度和酶量确定，下列底物的反应速率不同：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、环已醇、苯酚。以反应速率降低的顺序将上述底物重新排列并解释排列的原因。

八、 参 考 答 案

一、填充题

1酶蛋白 辅酶因子 酶蛋白 辅酶因子 2 凹穴 疏水

3 核酶（具有催化作用的RNA） 4酶的辅助因子 直接的激活剂 5 2 4 5 6 碱性氨基酸 碱性 7 n 小

8 远远超过酶浓度 最适温度 最适 初 9 酶的活力单位数

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10 81

11 绝对 立体 12 –1/Km 1/Vmax 13 亚基解离

14 正碳离子 五价磷过渡态 Zn2+-活化水 四面体肽键 氧阴离子 活化水 15 无酶时不反应 被靶酶专一性激活 与靶酶反应必须比解离更为迅速，即K1＞＞Kdis 16 最慢的 第一步反应 17 酶活性中心

18 别构酶 共价调节酶 齐变 序变 19丝氨酸

20蛋白激酶 蛋白磷酸酯酶

21糖基化 乙酰化 γ-羧基化 ADP-核糖基化 22天冬氨酸 组氨酸 23腺苷酰化 脱腺苷酰化 24比活力 总活力 25增大 变小

二、是非题

1错 2对 3对 4错 5错 6对 7错 8错 9错 10错 11对 12对 13错 14对 15错 16错 17错 18错 19对 20对 21对 22错 23对 24错 25对

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26对 27错 28错 29错 30对

三、选择题

1D 2B 3A 4A 5D 6D 7D 8B 9A 10C 11C 12B 13A 14B 15A 16B 17B 18B 19C 20D

四、问答及计算题

1酶活力指酶催化某一化学反应的能力，可以用一定条件下所催化的化学反应的反应速度来表示。

酶比活力指一定量的酶，例如1mg或1g等，所具有的总的活力。

由于酶催化的反应只在反应初始阶段具有恒定的速率，因此测定酶的活力以测定初速度为宜。

由于酶的活性受到测定环境如底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等影响，因此酶活力测定要选择最适条件，包括最适pH、最适温度、最适底物浓度、最适离子强度等。由于酶活力与酶量是成正比的，为保证所有的酶都能结合底物，参与反应，底物浓度要远远大于酶浓度。

2 已糖激酶能催化葡萄糖与ATP反应，使葡萄糖磷酸化。在无ATP时，葡萄糖与已糖激酶结合，能稳定游离酶分子，抵抗酶变性。由于无ATP，不会发生上述反应。

3 答：乙醇与甲醇竞争与醇脱氢酶作用，减少甲醇代谢生成甲醛。

4（1）竞争性；（2）不可逆；（3）不可逆；（4）不可逆；（5）竞争性

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5答：可以分别测定此酶对几种人工合成底物的米氏常数，然后比较它们的大小，数值最小的底物则和酶的亲和力最大，随着米氏常数的依次增大，各底物和酶的亲和力依次降低。

6 核酶是具有催化性的核糖核酸。用酶反应中间物作为抗原而诱导产生的具有对中间物催化能力的抗体定义为抗体酶。核酶不是蛋白质，而经典的酶几乎都是蛋白质。抗体酶是人为制备的抗体，只是具有催化能力，其结构具有抗体的特征，没有经典酶蛋白那样多变的结构。经典的酶所催化的反应基本上均是对机体中已有的生物分子，而抗体酶的“底物”可人为地选择。

7 decamethonium与酶非共价结合；竞争性可逆抑制剂；竞争性可逆抑制可以通过增加底物浓度来减累或解除抑制，乙酰胆碱是乙酰胆碱酯酶的底物。

DFP对乙酰胆碱酯酶的不可逆失活作用，要求DFP接近酶的活性位点的Ser，当可逆抑制剂decamethonium结合在活性位点上时，限制了DFP接近酶活性位点，但是decamethonium与酶的结合是可逆的，动态平衡的，也就是说，它与酶结合、被释放，再结合、被释放，很多次，DFP就有机会结合到酶的活性位点上，因为DFP是不可逆抑制剂，一旦结合就使酶失活，因此，一段时间后，DFP可以使所有的酶分子失活，只是失活的速度可以被decamethonium减慢。

8（1）一些肠道寄生虫如蛔虫等可以产生胃蛋白酶和胰蛋白酶的抑制剂，使它在动物体内不致被消化。

（2）蚕豆等某些植物种子含有胰蛋白酶抑制剂，煮熟后胰蛋白酶抑制剂被破坏，否则食用后抑制胰蛋白酶活性，影响消化，引起不适。

9 比活力=2.8U/5×10-3mg = 560 U/ mg

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转换数/活性位点=2.8umol/min÷(5ug/40 000ug/umol×4) = 5600/min = 93.3/s

10转换数=45.0×10-6×1 000×24 000=1 080/min

11答：（1）Vmax= 70umol/min （2）Km=1.5×10-5mol/L

（3）因为，[S]﹥﹥Km,[I],所以，υ= Vmax= 70umol/min

12答：先分别求出1/[S]，1/V，1/V′，作1/V∽1/[S]，1/V′∽1/[S]图，从图中求出：1/Vmax = 0.01 min/μmol Vmax = 100μmol/min

-1/ Km = -3.7×103L/ mol Km = 2.7×10-4mol/L -1/ Kˊm = -2.0×103L/ mol Kˊm = 5×10-4mol/L 因为Vmax不变，Km增大，所以是竞争性可逆抑制。

13答：（1）0.625mg蛋白质；250U （2）400U/mg蛋白质 （3）0.625g；2.5×105U

14答：因为胰凝乳蛋白酶Mr=25 000，所以它的27个丝氨酸残基中仅有一个发生反应，表明其中一个特殊的丝氨酸是活性位点的重要组成部分。（这个实验是许多酶修饰过程的原型，现在经常用于确定活性位点的组分。）

15答：乙醇﹥甲醇﹥丙醇﹥环已醇﹥酚 乙醇是“最好”的底物；甲醇太小，而其余的太大或疏水性太强，致使它们不能很好地进入活性部位。

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