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pH10→1.0连续变化的缓冲系统作洗脱，试说出每种肽洗脱的相对次序。 A 赖-甘-丙-甘 B 赖-甘-丙-谷 C 谷-甘-丙-谷 D 组-甘-丙-谷

3 某一条肽经酸水解组成分析含5种氨基酸，其N端非常容易环化。经CNBr处理后得一游离碱性氨基酸，Pauly反应阳性。若用胰蛋白酶作用则得两个肽段；其一为坂口反应阳性，另一在280nm有强的光吸收，并呈Millon氏阳性反应。求此肽段氨基酸排列顺序，并指出它的等电点应该是大于、等于或小于pH7。

4 蛋白质化学中常用的试剂有下列一些：CNBr，尿素，β-巯基乙醇，胰蛋白酶，过甲酸，丹磺酰氯，6mol/L HCl，茚三酮，异硫氰酸苯酯和胰凝乳蛋白酶等。为完成下列各项试验，请回答每项的最适试剂是什么？ （1）一个小肽的氨基酸顺序的测定 （2）多肽链的氨基末端的测定

（3）一个没有二硫键的蛋白质的可逆变性 （4）芳香族氨基酸残基的羧基一侧肽键的水解 （5）甲硫氨酸的羧基一侧肽键的裂解 （6）通过氧化途径将二硫键打开

5 将卵清蛋白（pI=4.6），脲酶（pI=5.0）及肌红蛋白（pI=7.0）这三种蛋白装入一根pH为6.5的DEAE-纤维素离子交换柱。用pH 6.5的稀缓冲液来洗脱，然后用含有更高浓度的NaCl的同样缓冲液洗脱。这三种蛋白质将以何顺序从柱中被洗脱下来？

6 一个Mr=24 000，pI=5.5的酶被两种蛋白质所污染。一种蛋白质分子质量与酶相同，

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pI=7.0，另一种蛋白质Mr=100 000，pI=5.4。如何进行纯化？

7 一个酶在pH为7时的水（缓冲液）中凝胶过滤被确定的表观相对分子质量为160 000。当用SDS凝胶电泳分析时，只有一条带，该带的表观分子量为40 000。这如何解释？

8 用SephadexG-200凝胶过滤分析，下列蛋白质以什么顺序出现：

核糖核酸酶（Mr=12 000）；醛缩酶（Mr=159 000）；血红蛋白（Mr=64 000） β-乳球蛋白（Mr=36 000）；血清血蛋白（Mr=65 000）

9 对照比较（1）胰岛素、（2）血红蛋白和（3）胶原蛋白的结构，它们全是由两个以上链构成的蛋白质，但却是通过不同类型的键将这些链聚集在一起的。

10 大肠杆菌含有2000种以上的蛋白质，为了分离它所表达的一个外源基因的产物并保持它的活性，常有很大的困难。但为了某种目的，请根据下列要求写出具体的方法。 （1）利用溶解度差别进行分离 （2）利用蛋白质分子大小进行分离 （3）根据不同电荷进行分离 （4）已制备有该产物的抗体进行分离 （5）产物的浓度 （6）产物纯度的鉴定

11 某种血清白蛋白，已知其含有0.58%色氨酸，并知道其含有2个色氨酸残基。则该蛋白质的相对分子质量为多少？

12 有一蛋白质溶液，体积为0.3mL，用0.9mL水稀释，取稀释后的溶液0.5mL，向其中

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加入4.5mL双缩脲试剂，显色后，在1cm厚比色杯中于540nm处测光吸收OD值为0.18，向标准溶液（0.5mL，含4mg/mL蛋白质）加入4.5mL双缩脲试剂，在同样条件下测得吸收值为0.12。计算原样品蛋白质浓度。

13 计算下列肽的等电点

（1）天冬氨酰甘氨酸（末端-COOH pK=2.10；末端-NH3+ pK=9.07；β-COOH pK=4.53） （2）谷胱甘肽（Glu末端-COOH pK=2.12；Glyα-COOH pK=3.53；末端-NH3+ pK=8.66；-SH pK=9.07）

14 有一个长链多肽，其侧链上有羧基30个（pK=4.3），咪唑基10个（pK=7.0），ε-氨基15个（pK=10），设C末端的α-羧基的pK=3.5，N末端的α-氨基pK=9.5，计算此多肽的等电点。

15 在体外，用下列方法处理对血红蛋白与氧的亲和力有什么影响？ （1）pH从7.0增加到7.4.

（2）CO2分压从10torr增加到40torr. （3）O2分压从60torr下降到20torr.

（4）2,3-二磷酸甘油酸的浓度从8×10-4mol/L下降到2×10-4mol/L （5）α2β2解聚成单个亚基。

16 某一蛋白质的多肽链在一些区段为α螺旋构象，在另一些区段为β构象。该蛋白质的相对分子质量为240 000，多肽链外形的长度为5.06×10-5cm。试计算α螺旋占分子的百分比？

17 要测定蛋白质的二硫键位置，需用什么方法？请简述之。

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18 有一蛋白质，在某一组织内含量较低，很难分离纯化，现已知其相对分子质量，并已有该蛋白质的抗体，问哪些实验方法可以初步证实该组织内的确含有该蛋白质？

19在pH9.0时，计算赖氨酸的两性离子、阳离子以及阴离子所占的比例。已知赖氨酸三个可电离基团α-COOH，α–NH3+和ε- NH3+的pK’a值分别为2.18、8.95和10.53。

20．用强酸型阳离子交换树脂分离下述每对氨基酸，当用pH7.0的缓冲液洗脱时，下述每对中先从柱上洗脱下来的是哪种氨基酸?

①天冬氨酸和赖氨酸；②精氨酸和甲硫氨酸；⑧谷氨酸和缬氨酸;④甘氨酸和亮氨酸；⑤丝氨酸和丙氨酸。

21．计算出由Ala、Gly、His、Lys和Val所构成的可能的五肽数目。

22．在大多数氨基酸中，α–COOH的pK’a值都接近2.0，α–NH3＋的pK’a值都接近9.0。但是，在肽中，α–COOH的pK’a值为3.8，而α–NH3＋的pK’a比值为7.8。你能解释这种差别吗?

23．某蛋白质用凝胶过滤法测定的表观分子量是90kD；用SDS-PAGE测定时，它的表观分子量是60kD，无论2-巯基乙醇是否存在。哪种测定方法更准确？为什么？

24．一种分子量为24,000、pI为5.5的酶被一种分子量类似、但pI为7.0的蛋白质和另外一种分子量为100,000、pI为5.4的蛋白质污染。提出一种纯化该酶的方案。

25请根据下面的信息确定蛋白质的亚基组成：① 用凝胶过滤测定，分子量是200kD；②用SDS-PAGE测定，分子量是100kD；③在2-巯基乙醇存在下用SDS-PAGE测定，分子

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量是40kD和60kD。

26一种纯净的蛋白质样品用普通的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)在pH8.2条件下进行分析鉴定，得到如图1–8(A)的结果。该蛋白质样品在用SDS处理后，接着用SDS-PAGE进行分析，得到如图1–8(B)的结果。通过对上述两种电泳结果的比较，关于该蛋白质的结构你将得出什么样的结论？该蛋白质的等电点是低于pH8.2还是高于pH8.2？

六、 参 考 答 案

一、填充题

COOH

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