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蓝耳病毒（PRRSV）ELISA检测试剂盒操作说明

一、介绍：

VDPro? PRRSV-VR或LV抗体检测试剂盒是用ELISA来定量检测猪蓝耳病毒（美洲株或欧洲株）抗体。试剂盒是用重组PRRSV（美洲株或欧洲株）的N蛋白包被，用来检测血清中N蛋白抗体。

通过监测猪群中PRRSV抗体滴度，这种血清学定量检测方法能够提供有效地信息，用来预防和控制该疾病。 二、试验原理：

VDPro? PRRSV-VR,PRRSV-LV抗体检测试剂盒是通过间接ELISA检测血清中PRRSV抗体，用重组N蛋白包被，酶标抗体为猪抗IgG。实验操作步骤是样品稀释，加样，孵育，洗涤；再加入酶标抗体，如果血清中含有N蛋白抗体，则抗体会与酶标板上包被的重组N蛋白结合，酶标抗体也会与血清中N蛋白抗体结合，加入底物后，颜色将会变深。如果血清中没有N蛋白抗体，颜色变化会很小，或不发生变化。 三、试剂盒内容：

1、PRRSV 重组N蛋白包被板 5块 2、10倍洗液 200毫升 3、血清稀释液 200毫升 4、酶结合抗体 50毫升 5、阳性血清对照 2毫升 6、阴性血清对照 2毫升

7、显色底物 60毫升 8、终止液 30毫升 四、采样标准

①尽可能采集新鲜血清样品。

②采集全血，分离出血清后，将血清存放在-20度冰箱，以备使用。 ③不要使用溶血或污染严重的样品

④大中型猪场监测时，每群（后备母猪、经产母猪、断奶仔猪等）采样不少于35头份； 五、注意事项：

1、使用之前请仔细阅读使用说和操作明； 2、试剂盒储存条件：4-8℃；

北京天悦生科技有限公司 地址：北京市朝阳区胜古家园C座806室 Tel:010-64440817，Fax:010-58857115

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六、实验前准备：

1、洗液10倍稀释：即20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。 2、TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。 七、样品稀释：

1、准备好1ml样品稀释板或微量试管；

2、样品按100倍稀释，分步稀释：即先加入90微升样品稀释液，再加入10微升的样品血清，混合均匀；再取90微升样品稀释液，加入10微升经过第一步稀释的血清，混合均匀即可。（阳性对照和阴性对照不要稀释）

★稀释后的样品可以同时用来检测PRRSV(美洲株) 、 PRRSV(欧洲株)和PCV-2。 八、操作步骤

1、实验前的准备及加样

①使用前所有试剂盒组都必须恢复到室温（18℃-25℃），试剂应轻轻旋转或振荡均匀。 ②将10洗液进行10倍稀释，如20毫升洗液加180毫升去离子水，即配制200毫升。 ③取出抗原反应板，在记录表上记录阴阳对照，样品的位置。

④分别在每孔加人100μl稀释后的样品、阳性和阴性对照，贴上封板膜，室温（22-27℃）孵育30min。 2、洗板及加试剂

①小心揭掉封板膜，弃去各孔中液体，拍净。每孔加满洗液300μl，洗3次。最后在吸水纸上拍净。

②每孔加入酶结合物100μl，置室温孵育30分钟。 ③重复①，洗5-6次。

④每孔加入TMB底物100μl，置室温孵育15分钟。 3、读数

每孔加入终止液50μl，置酶标仪450 nm波长处测定各孔OD450值。 九、结果判定

1、试验结果同时符合下列条件，方为有效： 阳性值≥0.5 阴性值≤0.3

2、判定标准：

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SP值的计算方程式：

SP=【（样品值-阴性值）/（阳性值-阴性值）】 SP值≥0.4 判为阳性； SP值＜0.3 判为阴性； 0.3≤SP值＜0.4，可疑

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