食品中菌落总数的测定

一、实验目的

（ 1 ） 学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法 （ 2 ） 学会菌落总数的报告方式二、实验材料

1 、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或 剪刀、 75% 酒精棉球、玻璃蜡笔。

2 、 培养基和试剂： 75% 乙醇、 0.85% 生理盐水、 琼脂培养基： 胰蛋白胨 5.0g 、酵母浸膏 2.5g 、葡萄糖 1.0g 、

琼脂 15.0g 、蒸馏水 1000mL 、pH 7.0 ± 0.2 3 、检样：利乐包装鲜牛奶 三、实验方法与步骤 1 、检验程序 菌落总数检验程序：

检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择

2-3 个适宜稀释度各以 1ml 之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入

46 ℃ 250ml

15-20ml 营养琼脂→置 36 ±1 ℃恒温箱内培养（ 48±2） h 取出 → 菌落数→报告 2 、检样稀释及培养

（ 1 ）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取 玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）

25ml 鲜牛奶，放于含有 ，经充分振摇做成

225ml 灭菌生理盐水的 500ml 灭菌

1 ： 10 的均匀稀释液。

9ml 灭菌生理盐水的试管内（注意吸管

（ 2 ）用 1ml 灭菌吸管吸取 1： 10 稀释液 1ml ，沿管壁徐徐注入含有 尖端不要触及管内稀释液，下同）

，振摇试管混合均匀，做成

1： 100 的稀释液。

1 支 1ml

（ 3 ）另取 1ml 的灭菌吸管，按上项操作顺序作 灭菌吸管。

10 倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用

（ 4 ）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择 作 10 倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移

3 个连续适宜稀释度即 10 、10 － 1、10 － 2，分别在

1ml 稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

15ml~20mL ，并转动平皿使与稀释检

（ 5 ）稀释液移入平皿后， 应及时将凉至 46℃营养琼脂培养基注入平皿 样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有 （ 6）等琼脂凝固后，翻转平板，置 即得 1mL 样品所含菌落总数。 四、检样中细菌菌落总数的计算与报告

1ml 稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。

36±1℃恒温箱内培养（ 48 ±2 ）h 取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，

1 、菌落计算方法

（ 1 ）菌落计数方法

做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 （ 2 ）菌落计数的报告

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①平板菌落数的选择

选取菌落数在 30 ～300 CFU 之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， ②稀释度的选择

应选择平均菌落数在

30～ 300 CFU 之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若

30 ～300 之 间， 按以下公式计算：

有两个稀释度，其生长的菌落数均在

N = 样品中菌落数

Σ C = 含适宜范围 CFU 的平板菌落数之和

n1 = 第一稀释度（低稀释度）平板个数n2 = 第二稀释度（高稀释度）平板个数d = 稀释因子（第一稀释度） 若所有稀释度的平均菌落数均大于 若所有稀释度的平均菌落数均小于

300 CFU ，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之， 30 CFU ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告

l 乘以最低稀释倍数报告之

， 若所有稀释度的平均菌落数均

若所有稀释度及样品原液均无菌落生长，则以小于 不在 30 ～ 300 CFU 之间，其中一部分大于 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告

300 CFU 或小于 30 CFU 时，则以最接近 30 CFU 或 300 CFU

菌落数小于 100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

菌落数大于或等于

100 CFU 时，第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位

数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。

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若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

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