第二章 核酸杂交技术

（一）名词解释 1．原位杂交

2．核酸分子杂交技术 3．探针 4．反向点杂交 5．缺口平移标记法 6．随机引物标记法 7．末端标记法

8．Southern blot杂交 9．荧光原位杂交 10．菌落杂交 （二）选择题 【A型题 】

1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（A G－C含量 B A－T含量 C A－G含量 D A－C含量 E T－G含量

2．液相杂交是下列哪一种（ ） A Southem印迹杂交 B Northem印迹杂交 C Dot印迹杂交 D Slot印迹杂交 E RPA实验

3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（ ） A 菌落杂交 B Southern杂交 C Northern杂交 D 液相杂交

E 原位杂交

4．Southern杂交通常是指（ ） A DNA和RNA杂交 B DNA和DNA杂交 C RNA和RNA杂交 D 蛋白质和蛋白质杂交 E DNA和蛋白质杂交

5．最容易降解的核酸探针是( ) A cDNA探针

B dsDNA探针 C ssDNA探针 D gDNA探针 E: RNA

6．探针基因芯片技术的本质就是（ ） A 核酸分子杂交技术 B 蛋白质分子杂交技术 C 聚合酶链反应技术 D 基因重组技术 E 酶切技术

7．DNA探针的长度通常为( )

A 1000 ～ 2000个碱基 B 500 ～ 1000个碱基 C 400 ～ 500个碱基 D 100 ～ 400个碱基 E. <100个碱基

8．寡核苷酸探针的最大的优势是（ ） A 杂化分子稳定

B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列 C 易标记 D 易合成 E 易分解

9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛

1

）B 乙醛 C 氢氧化钠 D 碳酸钠

E 盐酸

10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（ ）

A 脆性大

B 本底低

C 共价键结合

D 非共价键结合 E 高结合力

11．最常用的DNA探针标记方法是( ) A 随机引物 B 切口平移

C 3′ -末端标记 D 5′ -末端标记 E PCR法

12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（ ）

A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过

B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过

C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过

D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过

E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过

13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )

A T4多聚核苷酸激酶 B 末端转移酶 C AKP

D DNA polⅡ E DNA pol

14．血友病是一种（ ）

A 染色体病

B X连锁遗传病

C 先天性代谢缺陷病

D 先天畸形

E 常染色体隠性遗传病

15．预杂交中最常用的封闭剂是( ) A Denhavdt's溶液 B 5×TBE C 1×TBE D 1×TAE E 1×TPE

16．检测目标是RNA的技术是（ ） A Southern杂交 B Western杂交 C Northern杂交 D Eastern杂交 E 杂交淋巴瘤

17．检测靶序列是DNA的技术是（ ） A Southern杂交 B Western杂交 C Northern杂交 D Eastern杂交 E 杂交淋巴瘤

18．DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA分子成为单链，这一过程称（ ） A 变性

B 复性 C 复杂性

2

D 杂交 E 探针

19．具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（ ） A 变性 B 复性 C 复杂性 D 杂交 E 探针

20．一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（ ） A 变性 B 复性 C 复杂性 D 杂交 E 探针

21．点/狭缝杂交可以用于（ ） A 快速确定是否存在目的基因

B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定

的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C 用于基因定位分析 D 阳性菌落的筛选 E 蛋白水平的检测

22．放射自显影时反射光产生的潜影 在低温下较稳定，最适温度是( ) A -70℃ B -30℃ C -20℃ D -10℃ E 4℃

23．Southern印迹杂交可以用于（ ）

A 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定

的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 B 检测的目标是RNA C 用于基因定位分析 D 阳性菌落的筛选 E 蛋白水平的检测

24．寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为( ) A Tm=4(G+C)+2(A+T) B Tm=2(G+C)+4(A+T) C Tm=6(G+C)+4(A+T) D Tm=2(G+C)+6(A+T) E Tm=6(G+C)+2(A+T)

25．Northern印迹杂交可以用于（ ） A 快速确定是否存在目的基因

B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定

的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C 检测的目标是RNA D 用于基因定位分析 E 阳性菌落的筛选26

26．荧光原位杂交可以用于（ ）

A 快速确定是否存在目的基因 B 检测的目标是RNA C 用于基因定位分析 D 阳性菌落的筛选 E 蛋白水平的检测

27．以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（ ） A 正常人

3

B 杂合体患者 C 纯合体患者 D 携带者 E 不能确定

28．在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显( ) A pH为3～5 B pH为4～5 C pH为5～6 D pH为5～9 E pH为8～11

29．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（ ） A 2-10bp B 17-50bp C 60-100bp D 100-200bp E 200-300bp

30．变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )

A 甲酰胺 B 氢氧化钠 C 浓盐酸 D 稀盐酸 E 甲醇

31．下列有关cDNA探针的描述不正确的为（ ） A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针

B cDNA探针不包含内含子

C cDNA探针不包含大量的高度重复序列 D 由于cDNA探针自身所携带的poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题

E cDNA探针合成方便，成为探针的重要来源 32．一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行( ) A 15～25℃

B 10～15℃ C 5～10℃ D 30～40℃ E 40～50℃

33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其Tm值( ) A 30～40℃ B 20～30℃ C 15～30℃ D 10～15℃ E 5℃

34．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少℃下进行( ) A 90 B 80 C 75 D 68 E 58

35．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行( ) A 70 B 65 C 55 D 42 E 35

36．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%，则Tm值下降( ) A 0.5℃ B 1～1.5℃ C 2～2.5℃ D 3～3. S℃ E 4～4.5℃

37．RNA/RNA的杂交体的Tm值一般应增加( ) A 1～5℃ B 5～10℃ C 10～15℃ D 15～20℃ E 20～25℃

38．杂交的时间一般为Cot1/2的( ) A l倍 B 1～3倍

4

C 3 ～5倍 D 5～8倍 E 10倍以上

39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( ) A ssDNA B 1×SSC C 10×SSC D 5×TBEC E 50×TAE

40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( ) A 4个 B 6个 C 8个 D 10个 E 12个 【X型题】

41．下列哪些是影响DNA复性的因素( ) A DNA浓度 B DNA的分子量 C 温度 D 碱基组成 E DNA的来源

42． DNA探针的优点有（ ） A 制备方法简单 B DNA探针易降解

C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择

D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽 E 单链，不存在竞争性的自身复性

43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（ ） A DNA加尾法

B DNA切口平移标记法 C 随机引物标记法 D 末端标记

E 尾端标记

44．关于DNA变性的描述正确的是( ) A 二级结构破 B 一级结构破坏 C 黏度降低 D 生物活性丧失 E 浮力密度增加

45．以下哪些因素可以使DNA变性（ ） A 增加溶液的浓度 B 加热

C 改变溶液的pH值 D 有机溶剂 E 冷藏

46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( ) A ssDNA B BSA

C 小牛胸腺DNA D 脱脂奶粉 E DTT

47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（ ）A 粘度下降 B 沉降速度增加 C 浮力下降 D 紫外光吸收增加 E 紫外光吸收减少

48.下列物质适于非放射性探针标记的是( ) A AKP B ACP

C 生物素 D 地高辛 E 荧光素

49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( ) A 特异性高

B 可依赖氨基酸序列推测其序列

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