小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察

一、 实验目的

a) 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬大肠杆菌活动的观察,加深理解细胞吞噬

作用的过程；

b) 了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法。

二、 实验原理

吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质（直径一般大于250nm）的过程。

吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。

许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。

三、 实验仪器及试剂

a) 材料：健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，一部分腹腔

注射4％淀粉肉汤1mL另一部分不注射，大肠杆菌悬液。

b) 试剂:4%淀粉肉汤，D-Hanks液，0.85％生理盐水，180IU/mL肝素钠生理

盐水溶液

c) 普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃），5mL

一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等

四、 实验步骤

a) 巨噬细胞收集：分别用脱颈法处死一只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL的小

鼠和一只不注射的小鼠。然后都在腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。 b) 体外吞噬。在两支10mL玻璃离心管分别加入0.3mL注射淀粉肉汤的腹腔

液+0.3mL大肠杆菌悬液和0.3mL不注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液，放在37℃水浴锅中吞噬。

c) 制片及观察。 分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临

时装片，观察现象并作图。

d) 在0min和45min时在两管中分别取两滴混合液滴于载玻片上，用次甲基

蓝染色5分钟后装片观察。

五、 实验结果

a) 0min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片（次甲基蓝染色）

由图知，注射淀粉肉汤的巨噬细胞的数量较多。 b) 15min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片

c) 30min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片

d) 45min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片（染色）

六、 实验分析

由实验的所得图中可以知道，注射肉汤的巨噬细胞的数量较多。从0-45min，本应该看到巨噬细胞吞噬大肠杆菌的一个过程，但是可能是大肠杆菌的体积太小，或者是有两个时间段未进行染色，所以我觉得看的不是非常清楚。可能换成鸡血细胞会更加清楚。

七、 注意事项

a) 注射时注意不要注入皮下或将针头插进小鼠内脏。 b) 抽取腹腔液时应从空隙处抽，放止针头被堵。