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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、筛选菌株 1．原理

人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

2．途径

用选择培养基筛选。

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。用其培养的目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。

二、统计菌落数目的方法和注意事项 1．常用方法：稀释涂布平板法 (1)统计依据：

①当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。 (2)计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。

C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。 V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积。 M：代表稀释倍数。

(3)注意事项：

①一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ②统计菌落数往往比活菌的实际数目低。 ③统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

④设置对照：目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信

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度。

2．计数方法

利用显微镜直接计数。 三、实验设计 1．土壤取样

从富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤中取样。取样时，一般要铲去表层土，在距地表的3～8 cm的土壤层取样。

2．样品的稀释

样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300之间，便于计数。

3．细菌的培养与观察

将培养基平板倒置于30～37 ℃温室中培养1～2 d，每隔24_h统计一次菌落数目，最后选取数目稳定时的记录作为结果。

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中的细菌数目。

一、选择题

1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(A)

A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

解析：能选择出分解尿素的细菌的培养基必须是以尿素为唯一氮源，B、D不符合。C没

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有有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。

2．从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有(A) ①尿素 ②有机氮化物 ③无机盐 ④有机碳化物 ⑤水 ⑥无机碳化物 A．①③④⑤ B．②③④⑤ C．①③⑤⑥ D．②③⑤⑥

解析：分离能分解尿素的细菌，故培养基中一定有尿素，一定没有有机氮化物；另外，水、无机盐和碳源、能源也是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，不能利用无机碳化物。

3．关于土壤取样的叙述错误的是(C) A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B．先铲去表层土3 cm左右，再取样 C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D．应在火焰旁称取土壤

4．取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是(D) A．活细胞数 B．死细胞数 C．菌落数 D．细胞总数

解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。

5．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有(A)

①由于土样不同 ②由于培养基被污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照 A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④ 6．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是(C) A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数 B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数

D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果

解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。涂布三个平板，作为重复组，取其平均值作为统计结果能

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