植物组织培养所用器具 下载本文

组织培养过程中所用到的用具

在植物组织培养过程中,使用的用具类型多样,如培养基配置用具、培养用具、接种用具等。在使用这些用具时,必须了解它的基本用途并学会它们的基本用法。

1、培养基配置用具

(1)烧杯 用于盛放、溶解化学药剂等,常用的规格有50ml、100ml、200ml、250ml、500ml、1000ml等。

(2)容量瓶 用于配制标准溶液,常用的规格有50ml、100ml、500ml、1000ml等。

(3)量筒 用于量取一定体积的液体,常用的规格有25ml、50ml、100ml、500ml、1000ml等。

(4)刻度移液管 用于量取一定体积的液体,常用的规格有1ml、5ml、10ml、20ml等。

(5)吸管 用于吸取液体,调节培养基的pH值及溶液定容时使用。 (6)玻璃棒 用于溶解化学药剂时搅拌时用。 2、培养用具

(1)试管 植物组织培养中常用的一种玻璃器皿,适合少量培养基及实验不同配方用。选用1.0cm*15cm和3.0cm*20cm规格的试管。

(2)三角瓶 植物组织培养中常用的培养容器,适合各种培养,如固体培养或液体培养,大规模或一般的少量培养。规格有50ml、100ml、150ml、200ml、500ml等,其口径均为25mm。三角瓶的好处是采光好,瓶口较小不易失水。 3、接种用具

(1)酒精灯 用于金属接种工具的灭菌。

(2)手持喷雾器 盛装70%的酒精,用于接种器材、外植体和操作人员手部等的表面灭菌。

(3)镊子 使用于转移外植体和培养物,接种操作及继代培养时移取织物材料用。

(4)剪刀 用于剪取外植体材料及接种时用。 3、小型器具

移液枪 用于配制培养基时添加各种母液及吸取定量植物生长调节物质溶液。有固定式和可变式两种,规格有25、100、500、1ml、5ml、10ml。 微波炉、电炉等加热器具 用于加热生化试剂时,溶解琼脂。 4、仪器

(1)酸度计 植物组织培养基的pH值的调整十分重要。因此,配制培养基时,需要用酸度计来测定和调整pH值。常用小型式酸度计,即可在配制培养基时使用,又可测定培养过程中pH值的变化。测定培养基pH值时,应注意搅拌均匀后再测定。酸度计在使用之前,要调节温度到适当的室温,在用pH标准液(pH值4.0或pH值7.0)矫正后,蒸馏水充分洗净,才能进行pH的测定与调整。 (2)天平 称量化学试剂用,用到的有以下两种:

药物天平 用于称量大量元素、琼脂、蔗糖等,称量精度为0.1g。 电子天平 精度0.001,用于称量微量元素植物激素及微量附加物。 (3)高压蒸汽灭菌锅 用于培养基、蒸馏水、和各种器具的灭菌消毒等是植物组织培养中最基本的设备之一。高压蒸汽灭菌时,一般在121摄氏度控温15-40min,即可切断电源,缓慢将压制读数为0时,方可取出灭菌物。

(4)冰箱 用于储存培养基母液。生化试剂及低温处理材料,一般用家用冰箱即可。

培养基

1.2.1

培养基成分

培养基的成分是通过分析指物体的成分而制定的。一般培养几种常见的陈分有如下几种: 1.2.1.1 水

培养基中大部分成分是水,可提供植物所需要的碳、氢、氧,配制培养基时一般用离子交换水、重蒸馏水、蒸馏水。 1.2.1.2

无极营养成分

(1) 无机大量元素 指培养几种含量超过100mg/L的无机元素,包括N、

P、K、Ca、Mg、S等。

① 氮(N)。是细胞中核算的组成成分,也是生物体中许多酶的组成成分,氮 被植物吸收后转化为氨基酸再转化为蛋白质,然后被植物利用,氮还是叶绿体、维生素和植物激素的组成成分。氮主要以铵态氮、硝态氮两种形式被使用,实际中常常将两种混合使用,以调节培养几种的离子平衡,利于细胞的生长发育。一般认为,铵态氮的含量超过8mmol/L时容易伤害培养基。

② 磷(P)。参与植物生命活动中核酸和蛋白质的合成、光合作用、呼吸作用以及能量的储存、转化与释放等重要的生理生化过程,增强植物的抗逆

能力,促进早熟。组织培养过程中培养物需要大量的磷。常以盐的形式供给。

③ 钾(K)。是许多酶的活化剂。组织培养过程中钾能促进器官和不定胚的分化,促进叶绿体ATP的合成,增强植物的光合作用和产物的运输,能调节植物细胞水势,调控气孔运动,提高植物的抗逆性能。钾常以盐的形式供给。

④ 钙、镁、硫(Ca、Mg、S)。也是植物的必需元素,参与细胞壁的构成,影响光合作用,促进代谢等生理活动。钙、镁和硫的浓度以1~3mmol/L较宜,常以MgSO4和钙盐的形式供给。

(2)无机微量元素 是指在培养几种含量低于100mg/L的元素,主要有铁、铜、硼、锰、锌、钼、钴、氯。植物生长对微量元素需要量很少,一般为10-7~10-5mol/L,少多则会出现外植体蛋白质变性、酶系失活、代谢障碍等毒害现象。微量元素中铁对叶绿素的合成和延长生长起重要作用,通常以硫酸亚铁与Na2-EDTA螯合物的形式存在于培养基中,避免亚铁离子氧化产生氢氧化铁沉淀;硼能促进生殖器官的正常发育,参与蛋白质合成或糖类运输,可调节稳定细胞壁结构,促进细胞伸长和细胞分裂;锰参与植物光合作用、呼吸代谢过程,影响根系生长,对维生素C的形成以及加强茎的机械组织有良好作用;锌是各种酶的构成要素,增强光合作用效率,参与生长素的代谢,促进生殖器官发育和提高抗逆性;铜能促进花器官的发育;钼是氮素代谢的重要元素,参与繁殖器官的建成。 1.2.1.3有机营养成分