[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。2.培养基对微生物的选择作用。3.某种微生物数量的测定。4.微生物在其他方面的应用。

考点一 微生物的实验室培养

1．培养基

(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。 (3)种类

①按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。 ②按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。 ③按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。 2．无菌技术

(1)含义：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 (2)常用方法

3．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 (2)纯化大肠杆菌的方法

①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

特别提醒 a．操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：

第一次操作 每次划线之前 杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下目的 杀死接种环上原有的微生物 次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少

b.灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

c．第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 d．划线时最后一区不要与第一区相连。

e．划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。

②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 划线结束

(3)菌种的保存方法

①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

1．判断常考语句，澄清易混易错

(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质( √ )

(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上( × ) (3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害( √ ) (4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落( × )

(5)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落( √ )

2．分析命题热图，明确答题要点

如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考：

(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？

提示 获得效果A的接种方法为稀释涂布平板法，获得效果B的接种方法为平板划线法。

(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？

提示 最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。 (3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ 提示 火焰附近存在着无菌区域。

命题点一 培养基及其制备方法分析

1．下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是( )