微生物实验报告

实验十 细菌常用生理生化反应实验培养基的制备 一 实验目的

1 熟习生理生化反应培养基的配制原理和一般方法步骤 2 熟悉高压蒸汽灭菌的原理方法 ３ 为生理生化反应实验准备培养基 二 培养基配方

1 葡萄糖蛋白胨水培养基（用于 V. P. 反应和甲基红试验）：蛋白胨 0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO40.2g, 水1000mL，pH7.2，115℃湿热灭菌20min 2 蛋白陈水培养基（用于吲哚试验）：蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.2-7.4，121℃灭菌20min 3 硫化氢实验培养基：蛋白胨 10g， NaCl 5g，牛肉膏 10g，柠檬酸铁铵 5g,硫代硫酸钠, 5g, 蒸馏水 1000mL，pH 7.0～7.4，分装试管，每管高度 4～5cm。 11５℃灭菌 20min

4 硝酸盐还原培养基：蛋白胨 10g， NaCl 5g， KNO3（分析纯）1～2g，蒸馏水1000mL，pH7.4，分装小试管， 121℃灭菌20min

5 柠檬酸盐培养基：NH4H2PO4 1g，K2HPO4 1g，NaCl 5g，MgSO4·7H2O 0.2g，柠檬酸钠 2g，琼脂 15-20g，蒸馏水 1000mL，1%溴麝香草酚蓝酒精液 10mL。将上述各成分加热溶解后，调pH6.8，然后加入指示剂，摇匀。制成后为黄绿色，分装试管，112℃灭菌20min后制成斜面。

6 富氏明胶培养基： NaCl 5g，K2HPO4 1.5g，KH2PO4 0.5g，明胶 4.0g，蛋白胨 0.1g，牛肉膏 5g，琼脂 15-20g，葡萄糖 0.05g，蒸馏水 1000mL，pH7.2，115℃灭菌20min

7 淀粉培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，牛肉膏 5g，可溶性淀粉 2g，蒸馏水 1000mL，琼脂 15-20g，121℃灭菌20min

8 葡萄糖发酵培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，葡萄糖 10g,蒸馏水 1000mL，琼脂 5g, pH7.4，加1%溴甲酚紫指示剂至紫色, 115℃灭菌20min 。

三 实验器材

1 药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、 1NHCl、1NNaOH溶液等。

2 器材：小烧杯、1000mL不锈钢杯、电炉、天平、牛角匙、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉塞、三角瓶、橡皮圈。 3 高压灭菌锅

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四 实验方法 1实验方法

１葡萄糖蛋白胨水培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支大试管):

换算---称量---溶解---调pH值---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)

2 糖蛋白胨水培养基(液体培养基, 配200毫升,分装20支大试管):

换算---称量---溶解---调pH值---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)

3 硫化氢实验培养基(配200毫升,分装20支小试管):

换算---称量---将蛋白胨琼脂溶解---稍冷加入其它成分---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)

4 硝酸盐还原实验培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支小试管):

换算---称量---溶解---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)

5 柠檬酸盐培养基(固体斜面, 配200毫升,分装20支大试管):

换算---称量---溶解---调pH值---加溴麝香草酚蓝指示剂---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)---灭菌后摆斜面

6 富氏明胶培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板):换算---称量---先将明胶溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)---灭菌后收藏

7 淀粉培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板):换算---称量---先将淀粉溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)---灭菌后收藏 8 葡萄糖发酵培养基(半固体培养基,配200毫升,分装20支小试管)：

换算---称量---溶解---调pH值---加溴甲酚紫指示剂---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)

2、灭菌:

3、按不同培养基的要求将培养基灭菌.

4、灭菌后将柠檬酸盐利用培养基摆斜面，其余垂直放置，收于实验台柜中 五 思考题

1 配置各种生理生化培养基时,分别应当注意什么事项?

（1）配制糖蛋白胨水培养基时，所用的蛋白胨最好含色氨酸较高，如用胰蛋白酶水解酪素得到的蛋白胨中色氨酸含量较高。

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（2）葡萄糖蛋白胨水培养基中含有葡萄糖，因葡萄糖高温易分解，为了减少葡萄糖的损失要115℃灭菌20分钟。

（3）硫化氢实验培养基需加硫代硫酸钠，其易分解，所以115℃灭菌。另外将蛋白胨琼脂溶解后，稍冷却再加入其成分。

（4）硝酸盐还原实验培养基使为了检测某些细菌能将硝酸盐还原为亚硝酸盐，所以KNO3要分离纯化，不能含杂质。

（5）柠檬酸盐培养基注意先调pH值再加入溴麝香草酚蓝指示剂，并注意加指示剂后培养基的颜色，以浅绿色为宜。

（6）富氏明胶培养基配制时将液体煮沸后先加入明胶，搅拌待其溶解后再加入其他成分。

（7）制淀粉培养基时先将淀粉溶解再溶解其它成分。

2 配培养基时，为什么要先调好pH值在加指示剂？

答：大部分指示剂时有机复合物显示一定的酸碱性，若先加指示剂再调则指示剂酸碱性会影响培养基的pH。

３ 为什么有些培养基要在１１５℃灭菌？

答：（1）葡萄糖蛋白胨水培养基、富氏明胶培养基、葡萄糖发酵培养基因含有葡萄糖，葡萄糖高温易分解，为减少损失，所以要115℃灭菌。（2）硫化氢实验培养基中含硫代硫酸钠，高温易分解，所以115℃灭菌。

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