图8 IMA免疫比浊法示意图
图9 IMA应用示意图
IMA的其它使用方法与速率法一样,仅限于R1+S低于反应杯最小容量的测试项目里。如果不存在这样的项目,那么即便是免疫比浊项目,也应该采用常规速率法或终点法。
定标方法:因数定标、线性定标和非线性定标;
在参数界面里的Calc mthd,也就是计算方式里,有ABS和STD/MSTD选择,表示吸光度和单点定标/多点定标计算。在ADVIA的所有机型里,定标中的零浓度点用试剂空白替代,所以在定标之前要做试剂空白,如果不做试剂空白,仪器会认为试剂空白就是原点。注意这个差别,与奥林巴斯的不同。奥林巴斯的试剂空白和零浓度校准点是两个概念,而在adiva里合二为一。
参数界面里的Formula,也就是公式才是选择定标方法的地方。
因数定标:如果在Calc mthd里选择ABS,那就意味着你要采用因数定标,那么在Formula里只有一个可以选择,那就是Linear,因数定标只能用于线性定标。
因数定标也就是直线方程里的Y=KX+B中的K,所以也叫K值定标法。而B的确定则需要试剂空白,所以因数定标法必须做试剂空白,然后结合给出的K值进行定标曲线的绘制,然后依据这个曲线进行浓度计算。在Advia中,K值的给出是在参数界面的Standards setting中的FV中。
线性定标:线性定标需要两个点才能决定一条直线,我们一般给出一个零浓度点,一个带有浓度的标准点,这样仪器就会自动进行计算。而Advia中零浓度点在试剂空白里给出了,所以对于两点线性定标来说,只需要在给出一个校准点就可以了。所以在Advia的手册里,线性定标叫做一点线性。而且Advia的所有校准点,无论是线性还是非线性,零浓度点都不计算在内,只数带有浓度的校准点,比如5点定标,加上零浓度点其实就是6点;而6点定标,加上零浓度点就是7点。
不过,要指出的是,Advia的试剂空白并不是强制性的,这一点与奥林巴斯不同。不进行试剂空白检查的项目,默认试剂空白也就是零浓度点的值是通过原点的。
下面给出两张图,一张做过试剂空白的线性定标,一张是没有做过试剂空白的线性定标。
图10 没有做试剂空白的线性定标
由于假设所有没有做过试剂空白的线性定标的零浓度点都通过原点,所以图中的蓝线则是默认的校准曲线,但实际上并非如此。如果提前没有做试剂空白,仪器也会自动做上,这样就会出现两个点,图中的两个红点就是。左下角是零浓度点,右上角是标准店。但蓝色的定标曲线却是右上角的红点和原点的连接,而不是与零浓度点连接。这样的结果我们都知道会有错误,因为真正计算的是按照蓝色直线计算,而红色的我自己画上去的示意线条才是真正的计算直线。
要解决这个问题,只有重测试剂空白重新执行定标才行。
下图是做过试剂空白的线性定标图例
图11 做过试剂空白的线性定标示意图
而在statistical Data里的FV就不是因数了,而是定标点的浓度。上面两张图很清楚的告诉我们,一点线性定标,有一个Blank试剂空白,FV为0.00,而STD值只有一个,就是标准点的值。