一般来讲，固定式吸液器比较准确，可调式吸液器使用较为方便。

3.定量吸液器的使用方法：

⑴选择适当的吸液器。吸液前先把吸嘴套在吸引管上，套上后要轻轻旋紧一下，以保证结合严密。

⑵持法：右手四指（除大拇指外）并拢握住吸液器外壳（使外壳突起部分搭在食指近端），大拇指轻轻放在吸液器的按钮上。

⑶取样(吸液)：用大拇指按下按钮到第一停止点，以排出一定容量的空气，随后把吸嘴尖浸入取样液内，徐徐松开大拇指，让按钮慢慢自行复原，取样即告完成。

⑷排液：将吸液器的吸嘴尖置于加样容器壁上，用大拇指慢慢地将按钮按下到第一停止点，停留1秒钟（粘性较高的溶液停留时间应适当延长）。然后再把按钮按到第二停止点上，让吸嘴沿管壁向上滑动。当吸嘴尖与容器壁或溶液离开时，方可释放按钮，使其恢复到初始位置。

⑸吸液器用后应及时取下吸嘴。将吸嘴用自来水冲洗后浸入盛水的容器内（以防干涸），待实验结束后集中仔细清洗。 三. 溶液的混匀 ㈠ 混匀的目的：

⒈使反应体系内的各种物质分子很好地互相接触，充分进行反应；

⒉使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。 ㈡ 混匀的方法通常有以下几种： ⒈使盛器作离心运动。

⒉左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，使管内溶液作旋转运动。 ⒊利用旋涡混合（振荡）器混匀。 ⒋不得已时可用干燥清洁的玻璃棒搅匀。 ㈢ 混匀的注意事项：

⒈防止盛器内的液体溅出或被污染。 ⒉严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。

实验一、蛋白质的性质实验（一） 蛋白质及氨基酸的呈色

反应

一、 实验目的：

1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

二、 实验原理（呈色反应）

蛋白质分子结构中某种化学键或氨基酸残基中的某些化学基团能与特定的化学试剂产生特定的有色物质，称为蛋白质的呈色反应。

各种蛋白质分子中氨基酸残基不完全相同，因此产生的颜色也不完全一样。当然呈色反应并不一定是蛋白质的专一反应，某些非蛋白质类物质也能产生类似折颜色。因此，不能仅仅根据呈色反应的结果来判断被测物质是否为蛋白质。 （一）双缩脲反应（Birut reaction） 1、原理

尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子有肽键。其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。

注意：双缩脲反应不仅含有两个以上肽键的物质所有。含有一个肽键和一个—CS—NH2，—

CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH，或

—CHOHCH2NH2等基团的物质以及乙二酰二胺（O=C（NH2）—C（NH2）=O等物质有此反应。 NH3也干扰此反应，因为NH3与Cu2+可生成暗蓝色的络离子Cu(NH3)42+，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反

加热 硫酸铜 应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

2、 试剂

1）尿素 10g 3）2%硫酸铜溶液 60mL

2)10%氢氧化钠溶液 250mL 5）0.5 %Glu溶液 4）2%卵清蛋白溶液 (1:6) 80mL

鸡蛋清用蒸馏水稀释6倍，通过2~3层纱布滤去不溶物即得。 3、 操作

取少量尿素结晶（火柴头大小），放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨基酸，形成双缩脲。冷却备用，为1号。

再取两支：分别加入卵清蛋白溶液和Glu溶液，为2号和3号。

编 号 10% NaOH （滴） 2% CuSO4 (滴) 现 象 1 双缩脲（少许） 5 1 2 卵清蛋白（1ml） 5 1 3 Glu(1ml) 5 1 在上述三支试管中分别进行如下操作：加10%氢氧化钠溶液约5滴，振荡混匀，再加2%硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。摇匀，再加2%硫酸铜溶液1滴，随加随振荡。观察紫玫瑰色的出现。 （二）茚三酮反应 1、原理

除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应十分灵敏，1：1500000浓度的氨基酸水溶液即能反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。

β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚

三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。

茚三酮反应分为两步：第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个水合基本分子和氨缩合生成有色物质。反应机理如下：

此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过在时甚至不显色。 2、试剂

1）蛋白质溶液 100mL 2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清：水=1：6）

2）0.3% Glu溶液 80mL 3）0.1% 茚三酮水溶液 50mL 3、操作

取2支试管分别加入蛋白质溶液和Glu氨酸溶液1mL，再各加2~3滴0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉红色变紫红色再变蓝。

体积（ml） 茚三酮（滴） 1（卵清蛋白） 1 3 2（Glu） 1 3 3 (Tyr) 1 3 实验三、蛋白质的性质实验（三） 蛋白质的等电点测定

一、 实验目的：

1、了解蛋白质的两性解离性质。 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。 二、 实验原理

蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：

其分子中所含的自由氨基和羧基均可能解离。当溶液的pH值大于蛋

白质的等电点，氨基的解离胺到抑制而羧基的解离度增大，此时蛋白质分子为带负电荷的阴离子。反之，当溶液的pH小于蛋白质等电点时，羧基的解离受到抑制而氨基的解离增加，而使蛋白质分子带正电荷。