徐州市传染病医院检验科生物安全手册XCJ-f01-01~30第A版

7.2工作内容危害度评估

4.7.3列出实验活动内容，按日常岗位分类

7.4分析每个岗位的哪些工作可能造成不良后果，预测风险等级，提出预防措施，评估预防措施实施后的残余风险。

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实验室设备和技术

实验室伤害以及与工作有关的感染主要是由于人为失误。不良实验技术以及仪器使用不当造成的。本章概要介绍了避免或尽量减少这类常见问题的技术和方法。

1冰箱与冰柜的维护和使用

1.冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁，应清理出所有在储存过程中破碎的安瓶和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。

2.储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。 3.应当保存一份冻存物品的清单。

4.除非有防爆措施，否则冰箱内不能放置易燃溶液。冰箱门上应注明这一点

2离心机的使用

1.在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。

2.应按照操作手册来操作离心机。

3.离心机放置的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置+字轴和离心桶。

4.离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在使用前应检查是否破损。

5.用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧(最好使用螺旋盖)。 6.离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。 7.离心桶和+字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。 8.操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。

9.空离心桶应当用蒸馏水或乙醇(异丙醇，70%)来平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用，因此不能使用。

10.对于危险度3级和4级的微生物，必须使用可封口的离心桶(安全杯)。 11.当使用固定角离心转子时，必须小心不能将离心管装得过满，否则会导致漏液。

12.应当每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏。如污染明显，应重新评估离心操作规范。

13.应当每天检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。 14.每次使用后，要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。 15.使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。

16.当使用离心机时，可能喷射出可在空气中传播的感染性颗粒。如果将离心机放置在传统的前开式的I级或II级生物安全柜内，这些粒子由于运动过快而不能被安全柜内的气流截留。而在III级生物安全柜内封闭离心时，可以防止生成的气溶胶广泛扩散。但是，良好的离心操作技术和牢固加盖的离心管

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可以提供足够的保护，以防止感染性气溶胶和可扩散粒子的产生。

3生物安全柜

I I级生物安全柜

在应用细胞和组织培养物来进行病毒繁殖或其他培养时，未经灭菌的房间空气通过工作台面是不符合要求的。I I级生物安全柜在设计上不但能提供个体防护，而且能保护工作台面的物品不受房间空气的污染。I I级生物安全柜有四种不同的类型(分别为A1, A2, B1和B2型)，它们不同于I级生物安全柜之处为，只让经HEPA过滤的(无菌的)空气流过工作台面。I I级生物安全柜可用于操作危险度2级和3级的感染性物质。在使用正压防护服的条件下，I I级生物安全柜也可用于操作危险度4级的感染性物质。 生物安全柜的使用

1.应参考国家标准和相关文献，对所有可能的使用者都介绍生物安全柜的使用方法和局限性。应当发给工作人员书面的规章、安全手册或操作手册。特别需要明确的是，当出现溢出破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。

2.生物安全柜运行正常时才能使用。

3.生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。

4.安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。

5.安全柜内不能使用本生灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。

6.所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。 7.尽量减少操作者身后的人员活动。

8.操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。

9.不要使实验记录本、移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。

10.工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。

11.在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5 minx 12.在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。

4一次性接种环

一次性接种环的优点是无需灭菌，因此可以在生物安全柜中使用。否则，使用本生灯和微型加热器会扰乱气流。一次性接种环使用后应置于消毒剂中，并按污染性废弃物处理。

5锐器

皮下注射针头用过后不应再重复使用，包括不能从注射器上取下、回套针头护套、截断等，应将其完整地置于盛放锐器的一次性容器中。单独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放锐器的一次性容器内焚烧，如需要可先高压灭菌。盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的，而且不能将容器装得过满。当达到容量的四分之三时，应将其放入“感染性废弃物”的容器中进行焚烧，如果实验室规程需要，可以先进行高压灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不能丢弃

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于垃圾场。

6移液管和移液辅助器

1.应使用移液辅助器，严禁用口吸取。

2.所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。 3.不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。 4.感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。 5.不能将液体从移液管内用力吹出。

6.刻度对应(mark-to-mark)移液管不需要排出最后一滴液体，因此最好使用这种移液管。

7.污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。

8.盛放废弃移液管的容器不能放在外面，应当放在生物安全柜内。 9.有固定皮下注射针头的注射器不能够用于移液。

10.在打开隔膜封口的瓶子时，应使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射针头和注射器。

11.为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。

7培养箱和水浴箱

1.每天检查温度，并做好记录。

2.确保定期清洁和消毒。

3.水浴箱不用叠氮化钠作抑菌剂。

4.发现故障应立即停止使用，将标本迅速转移至其他替代培养箱或水浴箱内，通知维修科维并报告科主任。

8尖锐器具安全使用

8.1不要重新给针头戴护套或截断针头。使用针头锁定型注射器以避免针头和注射器的分离，或使用针头和注射器为一体的一次性注射器。 8.2注射器抽液时要小心，尽可能减少形成 气泡和接种物泡沫。

8.3避免用注射器来混合感染性液体;否则，要确保针头的尖端伸入到容器中液面之下，并避免用力过大。

8.4从有橡皮塞的瓶子中取下针头之前，应用经适当消毒剂浸湿的脱脂棉来包裹针头和塞子。

8.5竖直向上将注射器中过量的液体和气泡排到经适当消毒剂浸湿的脱脂棉或装有棉花的小瓶中。

8.6操作感染性物质时均应在生物安全柜中进行。

8.7使用后要进行高压灭菌并确保进行了妥善处 理。如果使用的是一次性针头和注射器，只有在高压灭菌后才能拆卸。

9实验室中标本的安全操作

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实验室标本的收集、运输和处理不当，会带来使相关人员感染的危险。 9.1标本容器

标本容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品。标本容器应当坚固，正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。容器上应当正确地粘贴标签以便于识别。标本的要求或说明书不能够卷在容器外面，而是要分开放 置，最好放置在防水的袋子里。 9.2标本在设施内的传递

为了避免意外泄漏或溢出，应当使用盒子等二级容器，并将其固定在架子上使装有标本的容器保持直立。二级容器可以是金属或塑料制品，应该可以耐高压灭菌或耐受化学消毒剂的作用。密封口最好有一个垫圈，要定期清除污染。 9.3标本接收

需要接收大量标本的实验室应当安排专门的房间或空间。 9.4打开包装

接收和打开标本的人员应当了解标本对身体健康的潜在危害，并接受过如何采用标准防护方法的培训，尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此。标本的内层容器要在生物安全柜内打开，并准备好消毒剂。 9.5避免感染性物质的扩散

1.为了避免被接种物洒落，微生物接种环的直径应为2-3 m m并完全封闭，柄的长度应小于6 cm以减小抖动。

2.使用封闭式微型电加热器消毒接种环，能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好使用不需要再进行消毒的一次性接种环。 3.干燥痰液标本时要注意避免生成气溶胶。

4.准备高压灭菌和/或将被处理的废弃标本和培养物应当放置在防漏的容器内(如实验室废弃物袋)。在丢弃到废弃物盛器中以前，顶部要固定好(如采用高压灭菌胶带)。

5.在每一阶段工作结束后，必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染。 9.6避免感染性物质的食入以及与皮肤和眼睛的接触

1.微生物操作中释放的较大粒子和液滴(直径大于5 }m)会迅速沉降到工作台面和操作者的手上。实验室人员在操作时应戴一次性手套，并避免触摸口、眼及面部。

2.不能在实验室内饮食和储存食品。

3.在实验室里时，嘴里不应有东西一钢笔、铅笔、口香糖。 4.不应在实验室化妆。

5.在所有可能产生潜在感染性物质喷溅的操作过程中，操作人员应将面部、口和眼遮住或采取其他防护措施。 9.7避免感染性物质的注入

1.通过认真练习和仔细操作，可以避免破损玻璃器皿的刺伤所引起的接种感染。应尽可能用塑料制品代替玻璃制品。 2.锐器损伤(如通过皮下注射针头、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃)可能引起意外注入感染性物质。

3.以下两点可以减少针刺损伤:(a)减少使用注射器和针头(可用一些简单的工具来打开瓶塞，然后使用吸管取样而不用注射器和针头);(b)在必须使用注射器和针头时，采用锐器安全装置。

4.不要重新给用过的注射器针头戴护套。一次性物品应丢弃在防/耐穿透的