微生物生长、繁殖及传播

微生物控制

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灭菌方式

第三章 灭菌方式

灭菌与消毒

灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。

常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌（103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。温度达132℃以上并维持10分钟，即可杀死包括具有顽强抵抗力的芽胞、孢子在内的一切微生物。 ），高温干热灭菌（一般250℃，2小时）

消毒：采用较温和的理化因素仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。 本厂常用消毒剂：

75%乙醇：用于操作者手消毒、C级设备外表面、物料外表面的消毒。

0.1%新洁尔灭：用于对洁净区操作间内的棚顶、墙面、地面、操作台、与物料、产品不接触的设备外表面、工具表面等的消毒。

无菌：是指产品中不存在任何活性微生物。它是一个绝对的概念，无法通过实验加以证明。 无菌工艺：是药品达到无菌要求的另外一种方式，指对药品的各个组成部分，如原料、包装材料分别经过灭菌处理，而后再极高洁净环境下进行灌装和密封。产品在最终容器中不做最终灭菌处理。

灭菌方法：应用物理和化学等方法杀灭或除去一切存活的微生物繁殖体或芽孢，使之达到无菌的方法。

灭菌工艺：指通过适当的物理或化学手段，将一定数量的活性微生物完全杀灭，并且使其生命活动不可逆转的过程，是药品达到无菌要求的方式之一。

灭菌的目的：提高药物制剂的安全性、保护制剂的稳定性、保证制剂的临床疗效。 灭菌方法包括物理灭菌法和化学灭菌法。

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第一节 药品生产过程中各岗位的灭菌方式

洁净区（化学试剂）、设备（化学试剂、干热、湿热）、洗衣（湿热）、配制（过滤、湿热）、器具灭菌室（湿热、干热灭菌）、空调（过滤）、水（过滤）

厂房经过改造或生产一定时间后要进行一次熏蒸消毒灭菌，本书以甲醛熏蒸为例，其原理是，甲醛经加热产生甲醛蒸汽，经一定时间后甲醛浓度达一定浓度从而杀死微生物。 甲醛气体含量越高，消毒效果越好。为了防止气体逸出厂房外对环境造成污染，在厂房熏蒸消毒之前，一定要检查厂房的密闭性，确保厂房密闭不会有甲醛气体溢出。一般厂房不应低于18℃，相对湿度以60％～ 80％为好，不宜低于60％。当厂房温度在26℃，相对湿度在80％以上时，消毒效果最好。厂房要求熏蒸消毒24小时以上。熏蒸消毒后逸散气体，消毒后禽舍内甲醛气味较浓、有刺激性，因此，要通风换气，等甲醛气体完全逸散后再使用。如急需使用时，可用氨气中和甲醛，按空间用氯化铵5克/立方米、生石灰10克/立方米、75℃热水10毫升/立方米，混合后放入容器内，即可放出氨气(也可用氨水来代替，用量按25％氨水15毫升/立方米计算）。30分钟后打开空调系统对厂房进行通风，通风30～60分钟后即可进厂房进行操作。

药品从配置到罐装要经过多次过滤除菌，制水系统、空调送风系统也是经过过滤法进行除菌，除菌过滤是指除去流体中微生物的工艺过程，该过程不应对 产品质量产生不良影响 。包括

液体和气体除菌过滤 。药品生产中 采用的 除菌过滤 膜的孔径一般不超过0.22 2 μm(或者0. 2μm , 这两种标称没有区别）。 过滤除菌法分为绝对过滤和深层过滤。绝对过滤是过滤介质的滤孔

小于固体颗粒，把颗粒截留；深层过滤介质滤孔不一定小于固休颗粒，它是藉滤层内的曲折通道，把颗粒截留。过滤除菌的原理有惯性撞击截留作用、拦截截留作用、布朗扩散截留作用等。

无菌服配液罐装系统要经过湿热灭菌法进行灭菌。 不锈钢器具、玻璃器具经过干热灭菌法对其进行灭菌处理。

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第二节 常用灭菌法的选择

在无菌药品的生产中，防止微生物污染、内毒素污染一直是生产企业、监管机构关注

的重点。灭菌不仅要实现杀灭或除去所有微生物繁殖体和芽孢，最大限度地提高药物制剂的安全性， 同时也必须保证制剂的稳定性及其临床疗效，因此选择适宜的灭菌方法对保证产品质量具有重要意义 。

灭菌方法可分为 二大类：即物理灭菌法、化学灭菌法。

物理灭菌法：利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过

滤方法，杀灭或除去微生物的技术称为物理灭菌法。

1.干热灭菌法：利用高温使微生物或脱氧核糖核酸酶等生物高分子产生非特异性氧化而杀灭微生物的方法。包括火焰灭菌法、干热空气灭菌法。干热灭菌设备包括隧道式和干热灭菌烘箱。

2.湿热灭菌法：指物质在灭菌器内利用高压蒸汽或其他热力学灭菌手段杀灭微生物，具有穿透力强、传导快、灭菌能力更强的特点，为热力学灭菌中最有效及用途最广的方法之一。蒸汽湿热灭菌本身具备无残留，不污染环境，不破坏产品表面，容易控制和重现性好等优点。包括热压灭菌法、流通蒸气灭菌法、煮沸灭菌法、低温间歇灭菌法。 3.滤过除菌法：0.22μm、G6垂熔玻璃滤器。

4.射线灭菌法：辐射灭菌法、微波灭菌法、紫外线灭菌法。

化学灭菌法：指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法。灭菌剂可分为气体灭菌剂和液体灭菌剂，

--杀菌剂是指对微生物具有触杀作用的化学药品。分为气体杀菌剂和液体杀菌剂。 --杀菌剂只对微生物繁殖体有效，不能杀灭芽孢。

--杀菌效能决定于微生物的种类与数量、物体表面光洁度或多孔性以及杀菌剂的性质等。

灭菌方法的选择受灭菌对象的稳定性、使用目的和具体条件等限制，可以选择不同的方法。比 如，环境设施宜使用化学灭菌法处理，玻璃容器一般使用干热灭菌处理，衣物、橡胶制品等多使用湿热灭菌处理，模拟分装用乳糖等粉剂则可以选择辐射灭菌处理。制剂产品的灭菌方法通常根据产品特性进行选择。无菌产品应在灌装到最终容器内后进行最终灭菌，如果因产品处方对热不稳定不能进行最终灭菌时， 则应考虑除菌过滤和(或）无菌生产。对非法规规定的最终灭菌工艺，如果无菌保证水平可达到官方认可的灭菌方法，则该方法经过验证后，可以作为替代的灭菌方法。

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为了保证产品的质量和安全，确保规定的无菌保证水平，可以参考欧盟的灭菌方法选择决策树，选择最佳的灭菌方法， 同时控制灭菌前微生物污染水平 。

无菌药品的生产企业，首先应根据特定的处方选择最佳的灭菌方法，然后再选择包装材料，使用热不定 的包装材料不能作为选择无菌工艺的惟一理由。某些特定产品的包装材料的选择还必须考虑灭菌方法以 外的其他因素，如容器类型，给药途径和病人受益等。比如容器类型不 能进行最终灭菌（如某些眼用产品），此类产品可以采用经过验证的无菌工艺生产，但 药品生产企业仍有责任不断寻找可接受的替代 容器，使得产品可以采用最终灭菌的方法。

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