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三 名词解释：

1. 盐析法：是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。

2. Ks盐析：在一定的pH和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作Ks盐析法。Ks盐析法多用于提取液的前期分离工作。

3．β盐析：在一定离子强度下仅改变pH和温度进行盐析，称作β盐析法。在分离的后期阶段，为了求得较好的分辨率，或者为了达到结晶的目的，有时应用β盐析法。β盐析法由于溶质溶解度变化缓慢且变化幅度小，沉淀分辨率比KS盐析法好。

4．亲和沉淀: 利用亲和反应原理，将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物（亲和沉淀剂），该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来。 四 问答

1.什么是盐析作用？盐析的原理是什么？

答：盐析作用：向蛋白质溶液中逐渐加入中性盐，在高盐浓度时，蛋白质溶解度随之减小，发生了盐析作用。产生盐析作用的一个原因是由于盐离子与蛋白质表面具相反电性的离子基团结合，形成离子对，因此盐离子部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间电排斥作用减弱而能相互靠拢，聚集起来。盐析作用的另一个原因是由于中性盐的亲水性比蛋白质大，盐离子在水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用，使其沉淀。 2.如何选择盐析所用中性盐？

（1）盐析作用要强。一般来说多价阴离子的盐析作用强，有时多价阳离子反而使盐析作用降低。

（2）盐析用盐要有足够大的溶解度，且溶解度受温度影响应尽可能小。这样便于获得高浓度盐溶液，有利于操作，尤其是在较低温度下的操作，不致造成盐结晶析出，影响盐析效果。

（3）盐析用盐在生物学上是惰性的，不致影响蛋白质等生物分子的活性，最好不引入给分离或测定带来麻烦的杂质。 （4）来源丰富、经济。 3.有机溶剂沉淀的原理是什么？

答：亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数，使溶质分子之间的静电引力增加，聚集形成沉淀；水溶性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度，降低了它的亲水性，导致脱水凝集。 4.有机溶剂沉淀影响沉淀效果的因素有那些？ 答： （1）有机溶剂种类及用量

（2）pH的影响

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（3）温度无机盐的含量 （4）某些金属离子的助沉淀作用 (5)样品浓度

第六章 吸附分离法（答案）

一、填空

1、吸附剂按其化学结构可分为两大类：一类是有机吸附剂，如 活性炭 、 淀粉 、大孔吸附树脂 等；另一类是无机吸附剂，如白陶土、 氧化铝 、 硅胶 、 硅藻土 等。

2、常用的吸附剂有 活性炭 、 硅胶 和 白陶土 等。

3、大孔网状聚合物吸附剂是在树脂聚合时加入 惰性 致孔剂，待网格骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或蒸馏水洗将致孔剂去掉，形成不受外界环境条件影响的 孔隙 ，其孔径远大于2～4nm，可达 100nm ，故称“大孔”。

4、大孔网状聚合物吸附剂按骨架的极性强弱，可分为非极性、中等极性、极性和强极性吸附剂四类。 二、选择题

1、用大网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质，一般用下列哪种溶液洗脱 （ D ）

A.水 B.高盐 C.低pH D. 高pH

2、“类似物容易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附极性物质

（ B ）

A.极性溶剂 B.非极性溶剂 C.水 D.溶剂

3、“类似物容易吸附类似物”的原则, 一般非极性吸附剂适宜于从下列何种溶

剂中吸附非极性物质。 （ A ）

A.极性溶剂 B.非极性溶剂 C.三氯甲烷 D.溶剂

4、下列属于无机吸附剂的是： （A） A.白陶土 B.活性炭 C.淀粉 D.纤维素

5、活性炭在下列哪种溶剂中吸附能力最强？ （A） A.水 B.甲醇 C.乙醇 D.三氯甲烷

6、 关于大孔树脂洗脱条件的说法，错误的是： （A） A .最常用的是以高级醇、酮或其水溶液解吸。 B. 对弱酸性物质可用碱来解吸。 C. 对弱碱性物质可用酸来解吸。

D.如吸附系在高浓度盐类溶液中进行时，则常常仅用水洗就能解吸下来。 三、名词解释

1、

吸附法(adsorption method)：指利用吸附作用，将样品中的生物活性物质或

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杂质吸附于适当的吸附剂上，利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，使目的物和其它物质分离，达到浓缩和提纯目的的方法。 2、

大网格高聚物吸附剂（macroreticular adsorbent）：在合成树脂时，加入一种惰性组分，它不参与聚合反应，但能和单体互溶，称为致孔剂。待网络骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或水洗蒸馏的方法将致孔剂去掉，就留下了不受外界条件影响的永久孔隙，其孔径远大于2~4nm，可达到100nm甚至1000nm以上，故称“大孔”。与大孔网状离子交换树脂相比，它不含离子交换树脂的功能团，仅保留了多孔的骨架，其性质与活性炭、硅胶等吸附剂相似，称为大孔网状聚合物吸附剂。

四、问答题

1、简述吸附法的定义和特点。

吸附法(adsorption method)指利用吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于适当的吸附剂上，利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，使目的物和其它物质分离，达到浓缩和提纯目的的方法。吸附法具有下列特点： (1)设备简单、操作简便、价廉、安全。

(2)少用或不用有机溶剂，吸附与洗脱过程中pH变化小，较少引起生物活性物质的变性失活。

(3)天然吸附剂(特别是无机吸附剂)的吸附性能和吸附条件较难控制，吸附选择性差，收率不高，难以连续操作。 2、影响吸附的因素有哪些？ ① 吸附剂的特性：

吸附现象在界面发生，因此吸附剂比表面积愈大，吸附量愈多。通过活化的方法也可增加吸附剂的吸附容量。另外还要求吸附剂的机械强度好，吸附速度快 ② 吸附物的性质：

能使表面张力降低的物质，易为表面所吸附；一般极性吸附剂易吸附极性物质，非极性吸附剂易吸附非极性物质；溶质从较易溶解的溶剂中被吸附时，吸附量较少；对于同系列物质，吸附量的变化是有规则的；吸附物若能与溶剂形成氢键，则吸附物极易溶于溶剂之中。 ③ 吸附条件：

温度：吸附热越大，温度对吸附的影响越大。

PH值：溶液的pH值溶液pH值可控制吸附剂或吸附物解离情况，进而影响吸附量，对蛋白质或酶类等两性物质，一般在等电点附近吸附量最大。

盐浓度：

溶剂的影响：单溶剂与混合溶剂对吸附作用有不同的影响。 ④ 吸附物浓度与吸附剂用量

一般情况下吸附物浓度大时，吸附量也大。

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第七章 凝胶层析（答案）

一、填空题

1、凝胶层析的分离原理有平衡排除理论、扩散分离理论、流动分离理论。这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下平衡排除理论起主导作用；扩散分离理论的作用随流速增加而加强；只有在流速很高时流动分离理论才起作用。

2、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而 下降 ，颗粒强度随浓度上升而 提高 。

3、凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。一般来说，细粒凝胶柱流速低，洗脱峰窄，分辨率 高 ，多用于 精制分离 等。粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰平坦，分辨率 低 ，多用于脱盐等。

4、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大 25 倍以上的柱体积， 25 以上的柱比，较 大 吸液量、较 细 粒的凝胶固定相。 5、溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括 分子扩散 、涡流扩散 、 流动相中传质阻力 、 固定相中传质阻力。

6、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于 交联度 ，其越小，凝胶孔径 越 大 ；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于 琼脂糖浓度 。 二、选择题

1、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是 （ B ）

A.凝胶排斥 B.凝胶吸附 C.柱床过长 D.流速过低

2、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是 （ A）

A.水合作用 B.凝胶吸附 C.柱床过长 D.流速过低

3、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是 （ B）

A.分子量最大的 B.体积最大的 C.分子量最小的 D.体积最小的 4、为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是 （C）

A.观察柱床有无沟流 B.观察色带是否平整 C.测量流速 D.测量层析柱的外水体积

5、在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是 （A）

A.粗且长的 B.粗且短的 C.细且长的 D.细且短的 三、名词解释 1、全排阻：

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