具有较大极性的化合物吸附较强，因而Rf值就小。因此利用化合物极性的不同，将它们分离开。

2．薄层板的制备 薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果，薄层应尽可能的均匀而且厚度(0.25～1mm)要固定。否则展开时溶剂前沿不齐，色谱结果也不易重复。

通常先将吸附剂调成糊状物：称取约10g硅胶，加蒸馏水20mL，立即调成糊状物。如采用10g氧化铝则加蒸馏水10mL可涂3cm〓12cm三至四片，然后将调成的糊状物采用下列两种涂布方法，制成薄层板。

(1)平铺法：可将自制涂布器(如图3.2)，洗净，把干净的玻璃板在涂布器中摆好，上下两边各夹一块比前者厚0.25mm的玻璃板，在涂布器槽中倒人糊状物，将徐布器自左向右推，即可将糊状物均匀地涂在玻璃板上。若无涂布器，也可用边沿光滑的不锈钢尺自左向右将糊状物刮平。

1— 吸附剂薄层 2— 涂布器 3— 玻璃夹板 4— 玻璃板 5— 玻璃夹板

图3.2 薄层涂布器

(2)倾注法：将调好的糊状物倒在玻璃板上，用手摇晃，使其表面均匀光滑。 3 薄层板的活化 将涂好的薄层板室温水平放臵晾干后，放入烘箱内加热活化，活化条件根据需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持105～110℃活化30min。氧化铝板在200～220℃烘4h可得活性Ⅱ级的薄板。150～160℃烘4h 可得活性Ⅲ～Ⅳ级的薄板。 薄板的活性与含水量有关，其活性随含水量的增加而下降。

氧化铝板活性的测定：将偶氮苯30mg，对甲氧基偶氮苯、苏丹黄（1）、苏丹红（1）和对氨基偶氮苯各20mg。溶于50mL无水四氯化碳中，以毛细管吸取少量溶液滴加在氧化铝薄板上，用无水四氯化碳展开，测定各染料的位臵，算出比移位，根据表3.1所列的各染料的比移值确定其活性等级：

表3.1 氧化铝活性与各偶氮染料比移值的关系 活性级别 勃劳克曼活性级的Rf值 偶氮染料 Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 偶氮苯 0.59 0.74 0.85 0.95 对甲氧基偶氮苯 0.16 0.49 0.69 0.89

苏丹黄 0.01 0.25 0.57 0.78 苏丹红 0 0.10 0.33 0.56 对氨基偶氮苯 0 0.03 0.08 0.19 硅胶板活性的测定：取对二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝和苏丹红三种染料各10mg，溶于1mL氯仿中，将此混合液滴于薄层上，用正己烷—乙酸乙酯(体积比9：1)展开。若能将三种染料分开，并且按比移值对二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红的顺序递减，则和B级氧化铝的活性相当。

薄层色谱在灵敏、快速、准确方面均比纸色谱优越。在显色方面，纸色谱法所用的显色剂都可用于薄层色谱法。此外薄层色谱法中还可使用一些腐蚀性的显

色剂如浓硫酸等，而在纸色谱中却不能使用。但薄层色谱法也有其不足之处，如在操作上不如纸色谱简便，色层板不易保存。 三、操作步骤

⑴ 硅胶G板的制备

取20cm〓5cm左右的玻璃片2块，洗净，晾干。

在一洗净的研钵中，放入约10～15g硅胶G，加入15～20mL蒸馏水，研磨，调成糊状。用牛角匙将此糊状物倾倒于上述玻璃片上，用食指和拇指拿住玻璃片，做前后、左右振摇摆动，使流动的糊状物均匀地铺在载玻片上（2）。将已涂好硅胶G的薄层板放臵在水平的长玻璃片上，室温放臵半小时后，移入烘箱，缓慢升温至110℃，恒温半小时。取出稍冷放人干燥器中备用。 ⑵ 点样

在小试管中，分别取少量0.5％～1％苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的氯仿溶液及以上三个样品的混合溶液为试样。

离薄层板一端约1cm处，用铅笔轻轻画一直线。取管口平整的毛细管，插入试样溶液中，注意毛细管必须专用，不可弄混，于画线处轻轻点样（3）。每块板可点样4个。先点纯试样，再点混合试样。晾干、备用。 ⑶ 展开

以体积比9：1的正庚烷与乙酸乙酯为展开剂，倒入层析缸(或大的广口瓶)，加入展开剂的高度不超过1cm。将点好样的薄层板小心放人层析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂约0.5cm，盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在展开剂的前沿画出标记，晾干，观察混合试样斑点出现的位臵及相应样品斑点是否相符。

本实验约需4～5h。

注释

⑴

CH3CH3HONNNN

苏丹红的结构｛1-[4-（2-甲苯基偶氮）-2-甲苯基偶氮]基-2-萘酚｝

HONN

苏丹黄的结构[1-(苯基偶氮)基-2-萘酚]

⑵要求制板厚薄均匀，须将物料调稀点。制硅胶板更是如此，糊状物稠了难铺均匀。倒料多少要合适，一次做成为好。

⑶ 点样时，毛细管刚接触薄板即可。点样过量影响分离效果。点与点之间

应相距1cm左右。

⑷ 展开剂不超过点样线。

⑸ 取出薄板应立即在展开剂前沿画出标记，如不注意，展开剂挥发后，无法确定其上升的高度。也可先画出前沿，待展开剂到达立即取出。

思考题

⑴ 如何利用Rf值来签定化台物？

⑵ 展开剂的高度超过点样线，对薄层色谱有什么影响？

实验四、氧瓶法鉴定氮、硫、氟、磷

一、实验目的

⑴ 了解的元素定性分析意义和原理； ⑵ 氧瓶法的实验操作。 二、实验原理

氧瓶法是使有机物试样在充满氧气的燃烧瓶中燃烧氧化分解，并被瓶中的吸收液所吸收，然后选用适当的试剂和方法来分别鉴定各种元素。

O2, Pt 燃烧NO2-, NO3-, SO42-, PO43-, X-...有机化合物（C，H，N，S，X，P...）吸收瓶三、操作步骤

1、试样制备

试样 取样: 取少许待分析的试样,按上图用定量滤纸包好，紧紧夹在锥形瓶（500ml)的铂金丝上，瓶里加8ml2%NaOH和4滴H2O2。

点燃和燃烧：将氧气管插入瓶里尽量接近吸收液液面，通气60s，点燃滤纸尾部插入瓶中，倾倒瓶并握紧瓶塞，燃烧完后直立该瓶。

吸收：振荡锥形瓶直至瓶内烟雾完全消失，再煮沸数分钟以除去过量的H2O22、元素鉴定

1）氮的鉴定：试管中＋2滴试液←用3mol/L硫酸酸化＋数克Na2SO3（S）→泌析出上层清夜＋16滴二苯胺，观察颜色。

HN二苯胺（无色）HNO3HNO3HNNH

NN（蓝色）

2）硫的鉴定 （A）玫瑰红酸银法：取1小块滤纸，在上面滴1滴0.1%硝酸钡，出现湿斑点；在斑点上滴1滴新配0.1%玫瑰红酸钠，斑点变为棕红色。为防止过量玫瑰红酸钠存在，在斑点上再滴加2滴0.1%硝酸钡，用清水洗去过量的钡离子，烘干，剪下斑点。在斑点上滴1滴0.5%AgNO3，斑点颜色应无变化。滴1滴用醋酸酸化过的试液，观察斑点颜色。

OOONa+OONaO玫瑰红酸钠（黄色溶液）OOOAg2Ag+OOAgO玫瑰红酸银（蓝色沉淀）OBa2+OOOOOBa+2Na+O玫瑰红酸钡（棕红色沉淀）SO42-OOOOO

（B）硫酸钡-高锰酸钾法： 点滴板上＋3滴试样＋1滴饱和高锰酸钾混合，取1滴混合液滴在浸有BaCl2的干滤纸上，在70～80℃下烘7～8min，在清水中漂洗1min(除去过量BaCl2)，将滤纸丢入盛有0.5mol/L草酸液中。若有SO42-存在，滤纸上会有什么颜色？

3）氟的鉴定：试管中＋10滴试液＋3滴浓HCl，摇动试管，再加2～3滴锆－茜素溶液，观察颜色变化。

Zr(Aliz) + 6F-红紫色(ZrF6)2- + 4 AlizOOHOH黄色Aliz =O

4）磷的鉴定：试管中＋2滴试液+少许固体硝酸铵+10滴钼酸铵，用水浴加热（40～50℃），静止片刻，观察现象。

8PO43- + 12 (NH4)2MoO4 + 24H+8(NH4)3PO4 .12MoO3 .6H2O + 6H2O思考题

1）试样燃烧吸收后为什么要煮沸除去过量的H2O2？

2）在鉴定硫的A法中，为什么要防止有过量的玫瑰红酸钠存在？