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容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，混匀。此溶液中含铁量为100μg/mL，Fe2+的量浓度为1.79×10－3mol/L。

2. 铁标准溶液（Ⅱ）（Fe2+＝10μg/mL）：用吸量管准确吸取10.0 mL铁标准溶液（I）至100 mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度。此溶液铁含量为10μg/mL。

3. 0.15%（m/V）邻二氮菲水溶液（新鲜配制）。

4. 10%（m/V）盐酸羟胺NH2OH·HCl水溶液（新鲜配制）。

5. 缓冲溶液（pH＝4.6）：将68g乙酸钠溶于约500 mL蒸馏水中，加入29 mL冰乙酸稀释至1L。

6. 含铁水样（总铁含量0.3～1.4mg/mL）。

四、实验内容

1. 吸取1.00 mL铁标准溶液（I）（Fe=1.79×10－3mol/L），同时吸取1.00mL去离子水（空白试验），分别放入50mL比色管中，加入1.0mL10%NH2OH·HCl溶液，混匀。放置2min，加入2.0mL0.15%邻二氮菲溶液和5.0mL缓冲溶液，用水稀释至刻度，混匀。

2. 在722型分光光度计上，将邻二氮菲－Fe（Ⅱ）溶液和空白溶液分别盛于1cm比色皿中，安放于仪器中比色皿架上。按仪器使用方法操作，从420nm～560nm，每隔10nm测定一次。每次用空白溶液调零，测定邻二氮菲－Fe（Ⅱ）溶液的吸光度值。

3. 在吸收峰510nm附近，再每隔2nm测定一点。记录不同波长下的吸光度值。

4. 标准曲线的绘制

（1）用吸量管准确吸取0.00（空白试验），0.50，1.00，2.50，3.50，5.00和7.00mL铁标准溶液（Ⅱ）（含铁10μg/mL），分别放入50mL比色管中。各加入1.0mL10%NH2OH·HCl溶液，混匀。静置2min后，再各加入2.0mL0.15%邻二氮菲溶液和5mL缓冲溶液，用水稀释至刻度，混匀，放置10min。

（2）在722型分光光度计上，于508nm处，用1cm比色皿，以“空白试验”调零，测定各溶液的吸光度值，做记录。

（3）以含铁量为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 5. 水样中铁的测定 （1）总铁的测定

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用移液管吸取25 mL水样，放入50 mL比色管中，按照绘制标准曲线程序测定吸光度值。在标准曲线上查出水样中总铁含量（共做3份平行样）。

（2）Fe2＋的测定

用移液管吸取25 mL水样，放入50 mL比色管中，不加OH·HCl溶液，以2．．．．NH．．．．．．．．．下按绘制标准曲线步骤进行，测定吸光度值，在标准曲线上查出水样中Fe2＋的含量。

（3）计算

铁?mg/L??C?50m 或 铁?mg/L??标?Fe

VV式中 m——标准曲线上查出总铁或Fe2＋的含量（μg）；

C标·Fe——标准曲线上查出总铁或Fe2＋的含量（mg/L）； V——水样的体积（mL）； 50——水样稀释最终体积（mL）。 五、数据处理 （1）吸收光谱绘制

波长λ（nm） 吸光度A 波长λ（nm） 吸光度A 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 502 504 506 508 510 512 514 516 518 以波长为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，将测得值逐个描绘在坐标纸上，并连成光滑曲线，即得吸收光谱。从曲线上查得溶液的最大吸收波长λ铁的测量波长（又称工作波长）

（2）标准曲线绘制（终体积50 mL） 铁标准溶液（10μg/mL） 加入量（mL） Fe含量（μg） Fe浓度（mg/L） 吸光度值 1 0.0 0.0 0.0 0.0 2 0.5 5.0 0.10 3 1.00 10.0 0.20 4 2.50 25.0 0.50 5 3.50 35.0 0.70 6 5.00 50.0 1.00 7 7.00 70.0 1.40 max，即为测量

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绘制标准曲线。

（3）水样测定

水样编号 吸光度值 总 铁 Fe含量（μg） （mg/L） 平均含量（mg/L） 1 2 3 Fe2 ＋水样编号 吸光度值 Fe含量（μg） （mg/L） 平均含量（mg/L） 1 2 3

六、注意事项

1. 本实验旨在学会分光光度法测定水中微量物质时的最基本操作条件、原理和方法以及722型分光光度计的使用。因此，要仔细阅读仪器说明书，了解仪器的构造和各个旋钮的功能；在使用时，一定要遵守操作规程和听从老师的指导。 2. 在每次测定前，应首先作比色皿配对性试验。方法是：将同样厚度的4个比色皿分别编号，都装空白溶液，在508nm处测定各比色皿的吸光度（或透光率），结果应相同。若有显著差异，应将比色皿重新洗涤后再装空白溶液测定，直到吸光度（或透光率）一致。若经过多次洗涤，仍有显著差异，则用下法校正：

（1）以吸光度最小的比色皿为0，测定其余三个比色皿的吸光度值作为校正值。 （2）测定水样或溶液时，以吸光度为零的比色皿作空白，用其它各皿装溶液，测各吸光度值减去所用比色皿的校正值。

溶液吸光度测量值的校正示例

比色皿编号 1 2 3 4 空白溶液校正值（A） 显色溶液测得值（A） 校正后测得值（A） 0.0 0.0044 0.0088 0.0223 0.0 0.2041 0.4089 0.6234 空白 0.200 0.400 0.601 3. 拿取比色皿时，只能用手指捏住毛玻璃的两面，手指不得接触其透光面。盛好溶液（至比色皿高度的4/5处）后，先用滤纸轻轻吸去外部的水（或溶液），再用擦镜纸轻轻擦拭透光面，直至洁净透明。另外，还应注意比色皿内不得粘附小气泡，否则影响透光率。

4. 测量之前，比色皿需用被测溶液荡洗2～3次。然后再盛溶液。比色皿用毕

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后，应立即取出，用自来水及蒸馏水洗净、倒立晾干。

5. 仪器不测定时，应打开暗箱盖，以保护光电管。 6. 绘制吸收光谱时应选择恰当的坐标比例，曲线应光滑。 七、思考题

1. 根据实验数据，计算在最大吸收波长下，邻二氮菲-Fe（Ⅱ）的摩尔吸收系数ε。你的计算值与文献值ε＝1.1×104是否一致？如不一致，请作解释。

2. 本次实验中用722型分光光度计测得的最大吸收波长与文献值λ是否有差别？如有差别，请解释原因。

3. 单色光不纯对吸收光谱的测定有何影响？

max

＝508nm

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实验二 高吸光度示差分析法测量铬

一、 实验目的

1．了解高吸光度示差分析法的基本原理及特点 2．掌握高吸光度示差分析法的实验技术 二、 实验原理

吸光光度法一般仅适用于微量组分的测定，实践证明，在一般吸收光度法测定中如果吸光度值在0.2~0.8范围内，则读数误差较小。所以，在日常的测量中，我们应尽量控制待测溶液最终的吸光度值落在上述范围内。当待测定组分浓度过高或过低，会引起很大的测量误差，导致准确度降低。尽管采取了其它措施（如减少（或增加）称样，增加（或减小）稀释倍数等），仍不能使最终试液的吸光度值落在上述最佳范围内。为了避免测量时读数误差过大，提高分析的精密度和准确度，示差吸光光度法可克服这一缺点。目前，主要有高浓度示差吸光光度法、低浓度示差吸光光度法和使用两个参比溶液的精密示差吸光光度法。它们的基本原理相同，且以高浓度示差吸光光度法应用最多，仅介绍高浓度示差吸光光度法。

所谓高吸光度示差法，就是用一个比未知溶液浓度略低的已知浓度标准溶液为参比溶液，与未知溶液相比较，测量其吸光度，再从测得的吸光度值求出未知试液浓度的一种分析方法。

设用作参比的标准溶液浓度为Cs，未知溶液的浓度为Cx。根据Lambert—Beer定律应有： As?lgI0??bCs IsI0??bCx Ix Ax?lg式中As和Ax分别为标准溶液及未知溶液的吸光度、I0为入射光强度、Is和Ix分别为透过标准溶液和未知溶液后的透光度、ε和b分别为待测物质的摩尔吸光系数及吸收皿厚度。

两式相减（Ax-As），经整理得：

lgIS?lgIx??b?Cx?Cs?