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即lgIs??b?Cx?Cs? IxIs称作相对吸光度，用A（则： fAf?Ax?As）表示。Ix上式中lgAf?lgIs??(Cx?Cs) Ix上式表明，两溶液的相对吸光度Af值的大小与它们的浓度差成正比。根据此式可以计算未知溶液的浓度Cx。
高吸光度示差法与普通法相比，准确度有所提高，如果测量误差仅仅是由读数（A或T）的不确定引起的，那么，高吸光度示差法的光度误差，可以由下式表示：
?C0.4343?Tf? CTflg(TfTS)式中Tf为被测溶液以标准溶液CS为参比时的相对透光度，Ts为标准溶液的透光度。
由上式可以看出，随着参比溶液浓度的增加，参比溶液的透光度Ts变小，光度误差也随它降低。应用高吸光度示差法，充分利用了仪器的灵敏度，使其准确度与滴定分析和重量分析的准确度相近。
本实验以Cr（NO3）3为例，在550nm处进行普通吸收光度法测量，并与高吸光度示差法测量进行比较。 三、 仪器与试剂
1、仪器
721(722)型分光光度计 2、试剂
0.2500mol·LCr（NO3）3溶液
四、 实验内容 1．标准系列溶液的配制
准确分取2、4、6、8、10、12、14、16、18、20mL0.25mol.L-1Cr（NO）3溶液于25mL比色管中，用水稀释至刻度，摇匀。 2．工作曲线的绘制与试样的测定
用1cm吸收皿，在550nm处，分别测量下列溶液的吸光度。
-1
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（1）以水为参比，测量2~20mL 0.2500mol·L-1Cr（NO3）3标准溶液及未知试样溶液的吸光度。
（2）以8mL 0.2500mol·L-1Cr（NO3）测量10~20mL 0.2500mol·L-1Cr3标准溶液为参比，（NO3）3.标准溶液及未知试样溶液的吸光度。
（3）以中性滤光片（相对空气其A值约为0.45）代表参比溶液，测量10~20mL 0.2500mol·L-1Cr（NO3）3标准溶液及未知试样溶液的吸光度。 五、数据处理
1．以铬浓度为横坐标，测得的吸光度为纵坐标，在同一坐标纸上绘制（1）~（3）组的工作曲线。
2．从（1）~（3）组工作曲线上计算未知试样的浓度。 六、问题讨论
三组的测量结果是否一致？分析产生偏差的原因。
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实验三 水溶液中铬、钴的同时测定
一、实验目的
学习用分光光度法测定有色混合物组分的原理和方法。 二、实验原理
当混合物两组分M及N的吸收光谱互不重叠时，则只要分别在波长λ1和λ2处测定试样溶液中的M和N的吸光度，就可以得到其相应含量。但是，若M及N的吸收光谱互相重叠（如图所示），则可根据吸光度的加和性质在M和N
M?N的最大吸收波长λ1和λ2处测量总吸光度A?1M?N及A?。假如采用1cm比色皿，则可由下列方2程式求出M及N组分的含量：
M?NMNMNA?＝A?11＋A?1＝??1cM＋??1cN M?NMNMNA?＝A?22＋A?2＝??2cM＋??2cN
解此联立方程可得：
M?NNM?NNA???2?A???112cM＝ MNMN??????1?2?2?1M?NMA????11cMcN＝
?N?1
MNMN式中??1、??1、??2、??2 分别代表组分N及M在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。
本实验中测定Cr和Co的混合物。分别配制Cr和Co的系列标准溶液，在λ1和λ2分别测量Cr和Co系列标准溶液的吸光度，并绘制标准曲线。四条标准曲线的斜率即为Cr和Co在λ1和λ2处的摩尔吸光系数，代入上面公式中即可求出所测溶液中Cr和Co的浓度。 三、仪器与试剂
1．仪器
722型分光光度计、容量瓶（50mL）、刻度吸管（5mL，10mL）等。
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2．试剂
Co(NO3)2 溶液，0.700 mol∕L；Cr(N03)3 溶液，0.200 mol∕L；Cr3+、Co2+ 混合液。 四、实验内容
1．溶液的配制
1）Co2+ 系列溶液：取0.700 mol∕L的Co2+溶液2.50、5.00、7.50、10.00 mL于50 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。计算各溶液的Co2+ 浓度；
2）Cr3+ 系列溶液：取0.200 mol∕L的Cr3+溶液2.50、5.00、7.50、10.00 mL于50 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。计算各溶液的Cr3+ 浓度；
3）待测Cr、Co混合溶液的稀释：取5.00 mL 待测未知液， 用50 mL容量瓶稀释至刻度。
2．吸收曲线的测绘，确定λ1、λ2
选取Co2+ 和Cr3+ 系列溶液中的一个，以蒸馏水为参比，从450 nm到700 nm，每隔20 nm测一次吸光度，在吸收峰附近可多测几个点。分别绘制Co2+ 和Cr3+ 的吸收曲线，确定λ
Co
和λ
Cr
。
3．标准曲线的绘制 以蒸馏水为参比，在λ分别绘制λ
Co
Co
和λ
Cr
处分别测定Co2+ 和Cr3+ 系列标准溶液的吸光度。
和λ
Cr
波长处Co2+ 和Cr3+ 的四条标准曲线。
4．未知溶液的吸光度测定 以蒸馏水为参比，在λ五、数据处理
1．绘制Cr3+、Co2+ 吸收曲线，确定最大吸收波长λ2．分别绘制Co2+ 和Cr3+ 在λ
CoCrCo??1、??2、??2 ；
Cr
Cr
Co
和λ
Cr
处分别测定未知溶液的吸光度AλCoCr?Co和AλCrCr?Co 。
和λ
Co
；
和λ
Co
Cr的4条标准曲线，并计算摩尔吸光系数??1、
3．试样中Cr3+、Co2+ 含量的计算： 由未知溶液的吸光度AλCo六、问题讨论
1．同时测定两组分混合液时，如何选择吸收波长？ 2．若同时测定三组分混合液，怎么办?
Cr?Co和AλCrCr?Co，计算未知溶液中Cr3+、Co2+ 的浓度。
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实验四 紫外吸收光谱法测定水中的总酚
一、实验目的
1. 学会使用UV1100型紫外分光光度计；
2. 学会并掌握紫外吸收光谱曲线的绘制和测量波长的选择以及标准曲线的绘制。
二、实验原理
以同一个水样酸化后作空白对照，碱化后作测定样，用1cm石英比色皿在292.6nm处测定含酚量较高的水样，用3cm石英比色皿在238nm处测定含酚量较低的水样。
三、仪器、试剂
1. UV1100型紫外分光光度计（附1cm石英皿1套） 具塞磨口硬质玻璃试管（或比色管）10mL若干支 吸量管 1mL 1支 移液管 10mL 1支 2. 10mol/LNaOH水溶液 3. 0.5mol/LHCl水溶液
4. 0.250g/L苯酚标准溶液：准确称取25.0mg分析纯苯酚，用少量不含酚蒸馏水溶解，移入100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀。此溶液苯酚含量为0.250mg/mL。
5. 不含酚蒸馏水：（1）蒸馏水加入少量高锰酸钾的碱性溶液（pH＞11）后进行蒸馏制得（蒸馏过程中水应保持红色）。（2）于1L蒸馏水中加入0.2g经200℃活化0.5h的活性炭粉末，充分振摇后，放置过夜。用双层中速滤纸过滤制得。
四、实验内容
1. 绘制吸收光谱曲线和选择测量波长
（1）用吸量管取0.8mL苯酚标准溶液（0.250mg/mL）2份，分别放入硬质玻璃试管中，用无酚蒸馏水稀释至10mL，摇匀。
（2）其中一管中加1滴10mol/LNaOH溶液，另一管中加1滴0.5mol/LHCl溶液