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作空白。

（3）以酸化标样作空白对照，碱化标样作测定样，在752型分光光度计上，取狭缝宽度为2.05mm，用1cm石英比色皿，在波长220～350nm范围内，从220nm起每隔10nm测定一次吸光度值，并做记录。以波长为横坐标，对应的吸光度为纵坐标绘制吸收光谱曲线，并选择测量波长。

2. 绘制标准曲线

用吸量管分别吸取0.00，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL苯酚标准溶液（0.250mg/mL）各2份，分别放入试管中（请编上序号），用无酚蒸馏水稀释至10 mL，混匀。此苯酚标准溶液系列对应的浓度为0.00，5.0，10.0，15.0，20.0，和25.0 mg/L。同样以酸化标样作空白，碱性标样作测定样，在选定的工作波长处测定对应的吸光度值，做记录。以苯酚标准溶液的含量（mg/L）为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。

3. 水样的测定

（1）取含酚水样10 mL两份，放入硬质玻璃试管中。

（2）其中一管中加入1滴10mol/LNaOH溶液，另一管中加入1滴0.5mol/LHCl溶液，混匀。

（3）以酸化水样为空白对照（调零），碱化水样作测定样，在选定测量波长处测定吸光度值，然后在标准曲线上查出对应水样中的总酚含量（mg/L）。

4.实验数据处理

（1）记录各步试验条件和测得数据；

（2）绘制苯酚吸收光谱曲线，并选择测量波长；

（3）绘制标准曲线，并由曲线上求算水样中总酚含量（mg/L）。 五、注意事项

本实验旨在学会使用752型分光光度计。该仪器较精密可靠，使用前必须认真阅读仪器说明书，认真听老师讲解与安排。避免因使用仪器不当而造成仪器性能下降甚至损坏仪器。 六、思考题

1. 本实验中为什么使用石英比色皿？

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实验五 分光光度法同时测定维生素C和维生素E

一、实验目的

学习在紫外光谱区同时测定双组分体系—维生素C和维生素E。

二、实验原理

维生素C（抗坏血酸）和维生素E（α—生育酚）起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内能防止油酯变酪。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化剂性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。

抗坏血酸是水溶性的，α—生育酚是酯溶性的，但是它们都能溶于无水乙醇，因此，能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。

三、仪器与试剂

仪器 UV—2000紫外——可见分光光度计；石英比色皿2只，50mL容量瓶，10mL移液管2只。

试剂 抗坏血酸：称0.0132g抗坏血酸，溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于1000mL（7.5×10—5mol/L）；α—生育酚：称0.0488g α—生育酚溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于1000mL（1.13×10—4mol/L）；无水乙醇。

四、实验内容 1．配制标准溶液

（1）分别取抗坏血酸贮备液4.00、6.00、8.00、10.00mL于4只50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

（2）分别取α—生育酚贮备液4.00、6.00、8.00、10.00mL于4只50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。 2．绘制吸收光谱

以无水乙醇为参比，在320~220nm范围测绘出抗坏血酸和α—生育酚的吸收光谱，并确定λ1和λ2。 3．绘制标准曲线

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以无水乙醇为参比，在波长λ1和λ2，分别测定步骤1配制的8个标准溶液的吸光度。 4．未知液的测定

取未知液5.00mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。在λ1和λ2分别测其吸光度。

五、数据处理

1．绘制抗坏血酸和α—生育酚的吸收光谱，确定λ1和λ2。

2．分别绘制抗坏血酸和α—生育酚在λ1和λ2的4条标准曲线，并求出4条直线的斜率。

3．计算未知液中抗坏血酸和α—生育酚的浓度。

六、注意事项

抗坏血酸会缓慢地氧化成脱氢抗坏血酸，所以必须每次实验时配制新鲜溶液。

七、思考题

写出抗坏血酸和α—生育酚的结构式，并解释一个是“水溶性”，一个是“酯溶性”的原因。

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实验六 原子吸收测定最佳实验条件的选择

一、实验目的

1．了解原子吸收分光光度计的结构、性能及操作方法。

2．了解实验条件对测定的灵敏度、准确度和干扰情况的影响及最佳实验条件的选择。 二、实验原理

在原子吸收分析中，测定条件的选择，对测定的灵敏度、准确度和干扰情况均有很大影响。

通常选择共振线作分析线，使测定有较高的灵敏度。但为了消除干扰，可选择灵敏度较低的谱线。例如，测定Pb时，为了避开短波区分子吸收的影响，不用217.0nm的共振线，而常选用283.3nm的次灵敏线。分析高浓度样品时，也采用灵敏度较低的谱线，以便得到适中的吸光度。

使用空心阴极灯时，灯电流不能超过允许的最大工作电流值。灯的工作电流过大，易产生自吸（蚀）作用，多普勒效应增加，谱线变宽，测定灵敏度降低，工作曲线弯曲，灯的寿命减少。灯电流低，谱线变宽小，灵敏度高。但灯电流过低，发光强度减弱，发光不稳定，信噪比下降。在保证稳定和适当光强输出情况下，尽可能选用较低的灯电流。

燃气和助燃比流量的改变，直接影响测定的灵敏度和干扰情况。燃助比小于1:6的贫燃焰，燃烧充分，温度较高，还原性差，适于不易氧化的元素测定。燃助比大于1:3的富燃焰，燃烧充分，温度较前者低，噪音较大，火焰呈还原气氛，适于易形成难熔氧化物的元素测定。燃助比为1:4的化学计量焰，温度较高，火焰稳定，背景低，噪音小，多数元素分析常用这种火焰。

被测元素基态原子的浓度，随火焰高度不同，分布是不均匀的。因为火焰高度不同，火焰温度和还原气氛不同，基态原子浓度也不同。

原子吸收测定中，光谱干扰较小，测定时可以使用较宽的狭缝，增加光强，提高信噪比。对谱线复杂的元素，如铁族、稀土等，要采用较小的狭缝，否则工作曲线弯曲。过小的狭缝使光强减弱，信噪比变差。 三、仪器与试剂

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仪器 WFX—120型原子吸收分光光度计；镁空心阴极灯；空气压缩机；乙炔钢瓶； 试剂 镁贮备液：准确称取于800℃灼烧至恒重的氧化镁（A.R.）1.6583g，加入1 mol·L-1盐酸至完全溶解，移入1000mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。溶液中含镁1.000mg·mL-1。 四、实验内容 1．实验溶液的配制

（1） 用吸管吸取1.000 mg·mL-1Mg贮备液10mL至100mL容量瓶中，用蒸馏水

稀至刻度。溶液含Mg0.1000mg·mL—1。

（2） 准确吸取0.1000 mg·mL—1Mg标准溶液5mL至100mL容量瓶中，稀至刻度，

此标液含Mg0.00500mg·mL—1。

（3） 用0.00500mg·mL—1Mg标准溶液，配制100mL0.300μg·mL—1Mg的标准溶

液。

2．仪器的调节

（1） 开启仪器电源开关、灯电源开关，预热镁空心阴极灯，调节灯座的高低、

前后、左右的位置，使接受器得到最大的光强。

（2） 在285.2nm附近，调节波长直至观察到透光度最大值。若透光度超过100，

可降低高压，使透光度回到100以内。

（3） 燃烧器位置的调节。在燃烧器上方放一张白纸，调节燃烧器前后位置，

使光轴与燃烧器的燃烧缝平行并在同一垂面。将对光棒（或火柴棒）垂直于缝中央，透光度从100%变到0%，否则调整前后位置。再把对光棒插于缝的两端，透光度度大致相等（约30%左右），否则适当改变燃烧器的转角。

3．点燃火焰

（1） 开启空气压缩机，打开仪器上助燃气压表，调至压力0.2MPa。 （2） 开启乙炔钢瓶，调节减压阀使乙炔输出压力为0.07MPa左右。调节仪器

上燃气压力表，使其压力为0.05MPa左右。

（3） 先开启仪器面板上助燃气流量计开关，再开乙炔流量计开关，立即点火，

火焰点燃后，调节空气和乙炔流量的比例，用去离子水喷雾。

4．最佳实验条件的选择

（1） 分析线 根据对试样分析灵敏度的要求、干扰的情况，选择合适的分析