柱层析和薄层层析实验报告

篇一：柱层析实验报告 柱层析分离色素 一、【实验目的】

1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。

2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。

二、【实验原理】

叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、

胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。利

用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。 分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。柱层析法是色谱法中的一种，它是根据

混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解

度不同将各组分分

离。常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。 吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面

积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液

流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。由于不同化合

物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速

度下移，形成色带。继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过

程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。 本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚

提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附

柱上排列成为不同的色层，再利用

吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行

洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。

三、【实验材料】 原料：

新鲜的菠菜叶 试剂 ： 1． 无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝

2． 石英砂 6．饱和氯化钠溶液 3． 丙酮7.水硫酸钠

4． 石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材 ：层析柱（1×30cm）， 研钵， 蒸馏装置， 脱脂棉， 天平， 烧杯，过滤漏斗，玻璃棒， 锥形瓶， 分液漏斗， 试管 ，铁架台

四、【实验操作】 1． 色素的提取：

20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，

滤渣再用无水乙醇提取一次，合并