化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点

概念

化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术结合而建立起来的一种新型非放射性微量免疫分析技术，它根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。

原理

化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）基本原理

用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标

记蛋白质、激素、抗原、抗体、核酸探针等物质，当免疫反应体系发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最后产物中荧光强度。根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。

应用

化学发光免疫分析技术（CLIA）

各种激素、病毒抗原抗体、肿瘤标志物、感染性疾病、心脏标志物、治疗药物检测等各种抗原、抗体和半抗原

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）应用广泛

1.多肽类：蛋白质、激素（甲状腺激素、甾体类激素）。 2.病原体抗原/抗体 3.病毒性肝炎标志物 4.肿瘤相关抗原 5.药物 6.核酸

优缺点

优点

化学发光免疫分析法（CLIA）

? 单个样本检测速度快，适合做急诊； ? 灵敏度较高； ? 自动化程度高；

时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）

? 发射光和激发光有较大的STOKES位移——高特异性 ? 长寿命荧光，降低其他物质的荧光干扰——高灵敏度 ? ? 半衰期长达几十万年，试剂受干扰小——高稳定性 ? 荧光寿命长，易于自动化 ? 重复性好

? 标准曲线范围宽 ? 结果可靠

与其它技术的相对优势：

（1）、是现有的免疫检测方法中灵敏度最高的 （2）、是现有的免疫检测方法中稳定性最好的 （3）、多标记检测是目前所有免疫检测技术中独一无二的

缺点

化学发光免疫分析法（CLIA）

? ? ? ? ? 发光过程短 本底较高

仪器故障率较高 试剂稳定性差 检测精度不高 试剂价格高

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）

? 测量方式复杂 ? 仪器成本及维护费用高

? 环境及样品中同元素可导致本底干扰等

类型 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）* 原理及试剂 用化学发光物质直接标记抗原或抗体组成 是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物 发光类型 吖啶酯（acrydinum esters） 铕（ Eu3+ ）、 铽（ Te3+ ）及钐（ Sm3+ ）、 镝（ De3+ ） 化学发光与时间分辨荧光方法学比较

发光效率 化学发光 1% 时间分辨荧光 95% 重复检测 本底噪声 灵敏级数 标记物 标记位点 标准曲线 多标记 科研开发 不可重复 干扰大 10 -15 大分子化合物 1个/抗体 稳定2~4周 无 无 可无数次重复 零本底 10 -18 原子 可达20个/抗体 稳定达一年以上 有，最多可达四个标记 有

化学发光免疫技术原理图

时间分辨免疫技术原理图