实验一 细胞形态大小观察 一、 实验目的：

学习测微尺的使用，并测量洋葱内表皮细胞的大小。 二、 实验原理：

使用镜台测微尺 ，目镜测微尺（直线式、网格式）和微调焦轮上的标尺测量细胞的大小。 三、实验用品：

2.5% 番红溶液；洋葱上皮细胞；草履虫、洋葱根尖及其它细胞永久切片。 四、实验步骤：

（一）目微尺的校对：将目微尺放入目镜、台微尺卡在载物台上，调焦，看清台微尺，台微尺和目微尺左、右各选一重合线。并根据下面公式计算：

载玻片大小的台微尺→ 载物台→

→台、目微尺在视野内平行

圆的目微尺→目镜筒(10×,40×,100×)

→台、目微尺各选一重合线，读取这一范围内的格数→目微尺每格大小→

X10、 40、 100 = a a n ：台微尺刻度数

m ：目微尺刻度数 →移去台微 a ：:台微尺实际值（0.01mm）

尺，换上洋葱内表皮标本

（二）观察细胞形态，测量细胞大小：

1、观察洋葱表皮cell（取其内表皮放在载玻片上，加番红染5分钟封片观察） （1）测量细胞横截面面积

撕取洋葱内表皮0.3×0.3cm → 放于载玻片→ 番红染液染色5min

→ 加盖玻片（用滤纸条吸去多余的液体）→ 10×物镜下观察→ 粗调焦轮找到细胞→ 微调焦轮调节清晰，看到细胞 → 旋转目镜将标尺与细胞长边平行，并记录格数a → 旋转目镜将标尺与细胞宽边平行，记录格数b → 细胞截面面积=ax×bx（x实际数值前面已经校对）

（2）测量细胞厚度：

调节微调焦轮→ 两细胞之间变成细，黄亮色线，细胞表面柱状杂质（上表 皮）→ 记录微调焦论刻度

调节微调焦轮 → 两细胞之间黄亮线逐渐变粗，变黑，变成黑色细线，细胞 表面杂质（下表皮）→ 记录微调焦轮刻度

→ 两次记录之间焦轮刻度数c → 细胞厚度=c×2μm（微调焦轮刻度数2μm/格）

（3）测量细胞核体积

调节微调焦轮→ 细胞核清晰→ 调节目微尺测量细胞核→ 根据球的体积→计算细胞核的体积Vn

2、计算细胞体积，求NP

NP= ×100% (NP——核质比)

V长方体=a·b·c V椭圆形= 4πab2/3 (a→长半径b→短半径c→细胞高) V球=4πR3/3 V圆柱形=πr2h (r→半径 h→高)

3、其它细胞永久片的观察。 五、实验结果： 1、求洋葱细胞的NP。 2、画出洋葱表皮细胞。

3、其它细胞永久片的细胞形态图。

实验二 观察胞间连丝的形态 一、实验目的

观察植物细胞间的胞间连丝，认识细胞不是“独立王国”，每个细胞与其周围细胞有千丝万缕联系。 二、实验原理

除极少数特化的细胞外，高等植物细胞之间通过胞间连丝相互连接，完成细胞间的通讯联络。 三、实验材料

红辣椒。 四、实验步骤：

红辣椒表皮细胞临时制片：剪取一小块红辣椒→放在载玻片上→用手按住一边→用刀片小心刮去果肉→留下一层极薄（几乎透明）的表皮→用刀片切下刮去果肉的表皮（大小约0.3cm×0.3cm）→置于一干净载玻片上→加水一滴→盖片→用滤纸条吸去多余的水→观察（10×，40×）

五、实验结果：

画出胞间连丝图，说明胞间连丝作用。

实验三 液泡系、线粒体的活体染色

一、实验目的及意义：学习活体染色的方法和原理。 二、实验原理：

1、活体染色；用某些无毒或毒性较小的染色剂显示出细胞内某些天然构造的真实性，而不影响细胞的生命活力，也不产生任何的物理、化学变化引起细胞死亡，这种染色方法叫活体染色。

2、液泡系、线粒体是细胞内重要的细胞器，它们通过特殊的活体染色剂染色，可显示出生活状态下的形态结构。

3、染料：

酸性：带负电荷，易在细胞质中产生沉淀。（种类很少） 碱性；带正电荷，被普遍采用。

①中性红染液：是液泡系特殊的活体染色剂，可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色，而细胞质、细胞核不被染色。（黄豆芽）②Janus Green B 染液：是对线粒体具有专一性的染料，具脂溶性，解离后，有染色能力的基团带正电，结合在带负电的线粒体内膜上。由于线粒体内膜上细胞色素氧化酶系的作用，使染料保持氧化状态而显蓝绿色其它部分不染色。 三、实验步骤： 1：液泡系的观察：

取豆芽根尖1—2cm →用双面刀→先纵切一小部分→再沿切面→长纵切根尖→切下极薄一片，尽量是一层细胞→放在载玻片上→滴中性红溶液→染色10-15分钟→吸水纸吸去染液→滴加蒸馏水→加盖玻片→吸水纸吸去多余的水份→观察液泡大小及颜色变化（10×，40×）→在分生组织区细胞没有液泡，随着细胞的生长成熟，较大细胞中液泡小而圆、染色浓、数量多个，而成熟细胞中液泡发展成为一个中央大液泡、颜色浅，表现为几乎整个细胞被染色。

2：线粒体分布的观察 （1）植物细胞中线粒体分布：

用镊子撕洋葱内表皮（0.3×0.3cm）→置于载玻片上→滴一滴Janus Green B→染色30分钟→滴加蒸馏水→吸水纸吸干→盖片观察→10×观察→40×观察→载玻片上滴加松柏油100×观察。

（2）动物细胞中线粒体分布，取小鼠肝脏→放在表面皿→用Ringer 液冲洗多次,冲洗掉血水→用镊子分成4份，分别放在4个表面皿里→继续将分到的肝脏用

Ringer 液冲洗多次,冲洗掉血水→用滤纸条吸去多余的液体→用镊子撕成小块（约大米粒大小）（撕扯中有单个细胞掉下来）→用Janus Green B染色,染液不能完全浸没→染色30分钟,不停翻动组织块，以利于呼吸→及时补充表面皿里的水份，防止水份蒸发导致细胞悬液过浓。用吸管吸组织液（染色液）观察→加盖玻片时（加2根头发）→10×观察→40×观察→在载玻片上滴加松柏油，100×观察（观察后用镜头纸沾二甲苯擦掉镜头及玻片上的松柏油）→ 四、作业：

1、绘图豆芽根尖液泡系的分布（100×）。

2、绘图洋葱线粒体的分布（100×）。3、绘图鼠肝细胞线粒体的分布（100×）。