精品K12教育教学资料小初高试卷教案习题集

专题十六 基因工程和细胞工程

1．(2018·深圳调研)叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中，该技术能有效改良植物的品质。请回答：

(1)转基因技术的核心步骤是__基因表达载体的构建__，完成该步骤所需要的酶有__限制酶和DNA连接酶__。

(2)将植物体细胞处理得到原生质体，再通过__农杆菌转化法__或__基因枪__法，将目的基因导入原生质体，使原生质体再生出细胞壁之后，通过__植物组织培养__技术培养可得到相应的转基因幼苗。

(3)来自原核生物中有重要价值的外源基因，无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，就此分析，原因是__叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似(由于叶绿体大多数基因的结构、转录与翻译系统均与原核生物类似)__。

(4)对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，其遗传方式__不遵循__(答“遵循”或“不遵循”)分离定律，不会随__花粉__(“花粉”或“卵细胞”)传给后代，从而保持了__母本__(“父本”或“母本”)的遗传特性。

[解析] (1)基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，所需要的酶有限制酶和DNA连接酶；(2)植物细胞导入受体细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。原生质体再生细胞壁之后，通过植物组织培养获取幼苗；(3)叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似。(4)分离定律适用于有性生殖过程中细胞核遗传，故叶绿体转基因不遵循分离定律，为母系遗传。

2．(2018·天津市和平区生物一模)已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗的生产和抗体的制备流程如图1所示。请回答下列问题：

(1)过程①代表的是__逆转录__，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，它们应该能被受体细胞的__RNA聚合酶__所识别，以便于其催化转录过程。

(2)如图2为A基因的结构示意图，已知Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区域能指导蛋白质合成的片段转录产生的mRNA中A和U总数是__400__个。

(3)在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的__浆细胞__数目。

(4)在将X进行扩大培养前，至少需要经过2次筛选，第一次是将__杂交瘤细胞__筛选出来，第二次是将__能分泌所需抗体的杂交瘤细胞__筛选出来。 精品K12教育教学资料小初高试卷教案习题集

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(5)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的__A蛋白__来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的__抗A蛋白的单克隆抗体__与分离出的病毒进行特异性检测。

[解析] (1)由以上分析可知①是逆转录。启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，能启动转录过程。(2)已知图中Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，则空白区域中碱基总数为1200个，又已知空白区域中G和C的总数为400个，则A＋T总数为800个，每条链中A＋T总数为400个，根据碱基互补配对原则，由该区转录形成的成熟mRNA中A和U总数也是400个。(3)在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的浆细胞数目。(4)在将X进行扩大培养前，至少需要经过2次筛选，第一次是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是采用抗体阳性检测法筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞。(5)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的A蛋白所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或采用抗原—抗体杂交法，即用图中的抗A蛋白的单克隆抗体进行特异性结合检测。

3．如图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ(0.7 kb)、Pvu Ⅰ(0.8 kb)等为限制酶和其切割位点及其与复制原点之间的距离。已知1 kb＝1 000个碱基对，请回答下列问题：

R

R

(1)片段D为目的基因中的某一片段，则DNA聚合酶和DNA连接酶的作用形成的键依次是__②__(填图中数字)。

(2)图中作为目的基因运载体最理想的质粒是__B__(填“A”“B”或“C”)，请据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是__质粒A不含有标记基因；质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被破坏，使该质粒无法进行复制__。

(3)用EcoR Ⅰ全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒，并进行电泳观察，可出现长度分别为1．1 kb和__5.6__kb的两个片段，或者长度分别为__3.6_kb和3.1_kb__的两个片段(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计)。

(4)将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作，则受体细胞的类型包含__ABD__(多选)。

A．Ap蓝色 C．Ap、蓝色

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SR

RS

B．Ap白色 D．Ap白色

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(5)动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是__B__。 A．受精卵能使目的基因高效表达 B．受精卵可发育成动物个体 C．受精卵更易接受DNA的插入 D．受精卵体积较大，便于DNA导入操作

[解析] (1)DNA聚合酶和DNA连接酶的作用形成的键均为磷酸二酯键，因此都应为②。(2)由题图可知，切割目的基因应用PvuⅠ，但该限制酶会将c质粒的复制原点破坏，使该质粒无法进行复制，而质粒A不含有标记基因，因此两者都不能作为运载体。(3)根据题意，质粒B长度为2.7 kb，目的基因长度为4.0 kb，所以重组质粒长度为6.7 kb，如果出现长度为1．1 kb的一个片段，则另外一个片段的长度为5.6 kb。若目的基因与运载体反向连接，可形成长度分别为3.1 kb和3.6 kb的两个片段。(4)将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶后，可得到质粒自身环化形成的普通质粒、重组质粒和目的基因自身连接的DNA环三种类型。如果导入的是普通质粒，受体细胞的类型为A(Ap、蓝色)，如果导入的是重组质粒，受体细胞的类型为B(Ap、白色)，如果导入的是DNA环，受体细胞的类型为D(Ap、白色)。(5)动物基因工程通常选用受精卵作为受体细胞的根本原因是受精卵可发育成动物个体。

4．人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答下列问题：

R

S

R

(1)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有__动物细胞培养、动物细胞融合__。 (2)若要分析杂交瘤细胞中染色体，可通过__解离、漂洗、染色和制片__等过程制成装片，然后在显微镜下观察。杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是__染色体数目加倍__，在HAT培养基上存活的细胞可能包括__①②③__(填下列序号)。

①无抗体分泌的细胞 ②抗HPV抗体的分泌细胞 ③其他无关抗体的分泌细胞

(3)对于抗体检测呈__阳__性的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个/ mL，每孔加入细胞稀释液__0.1__mL，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。

(4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是__小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在着排异反应__。

(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的制备单克隆抗体技术外，精品K12教育教学资料小初高试卷教案习题集