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的等电点应大于7。

8．Met－Asp－Phe－Thr－Ser。用BrCN处理得到一个游离的高丝氨酸说明N一末端是Met。胰凝乳蛋白酶水解得到两个片段，酸性强的含有甲硫氨酸表明： Met－Asp－Phe；羧肽酶A作用结果说明C端是一Thr－Ser。所以该五肽的顺序是：Met－AsP－Phe－Thr－Ser。 9．血红蛋白是一种寡聚蛋白由四个（ααββ）亚基组成，肌红蛋白只由一条多肽链组成；血红蛋白的α和β链与肌红蛋白具有相同的三级结构，在与氧的结合过程中肌红蛋白呈饱和曲线，但是由于血红蛋白具有协同效应，所以呈S型曲线。

10．五肽的氨基酸顺序是：Gln－Trp－Lys－Trp－Glu酸水解五肽只得到三种氨基酸，说明两种氨基酸被酸解破坏，可能是Gln和Trp。胰蛋白酶水解后得到的两个片段，说明Lys不是末端氨基酸。一个肽段带正电荷，与DNFB作用再用酸水解生成DNP-Glu，说明N-末端是Gln，且含有Arg；一个带负电荷可能含有Glu和中性氨基酸Trp，胰凝乳蛋白酶水解产生游离的Glu，表明C-末端是Glu并且是Trp-Glu，因此判断五肽的氨基酸顺序是Gln-Trp-Lys-Trp-Glu。 11．血红蛋白是一种寡聚蛋白，由四个（ααββ）亚基组成，在两个亚基之间夹着一个带

有三个负电荷基团的 DPG（ 2，3一二磷酸甘油酸）分子，与每个β亚基的三个正电荷基团（1位 Val的α一氨基， 82位Lys

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的ε一氨基，43位 His的咪唑基）互相吸引形成六个盐桥，这些盐桥在很大程度上束缚了血红蛋白的构象，导致它对氧的亲和力下降，远远低于无DPG存在时血红蛋白与氧的结合能力。换句话说，DPG使脱氧血红蛋白分子的四级结构进一步稳定，对氧的亲和力降低。在氧丰富的肺脏DPG浓度低，血红蛋白对氧的亲和力高，能最大限度地与氧结合，到了肌肉、脑及其它组织糖代谢旺盛，DPG丰富，插人到血红蛋白的分子中，导致血红蛋白与氧的亲和力降低，释放出氧。长期生活在高山缺氧地区的人群，血液中DPG的含量明显高于在平原和沿海地区生活的人群。

12．该蛋白质分子中总共可解离出（10＋2＋14）=26个质子（H+），当溶液的pH值达到该蛋白质的等电点时，蛋白质分子所带的净电荷为零，应有16个质于被摘定，即 10个羧基、 2个咪唑基和 4个氨基解离下来的 H+被滴定。

pH 1.0 3.5 6.0 10.0 12.0 解离的H+数 0 5 11 19 26

依此作曲线（图3一2）可知，当16个H+被滴定掉时，溶液的pH值约为9.5，即蛋白质的 pI= 9.5。

13．电泳分离技术是根据物质带电荷的多少达到分离的目的。待分离的物质所带电荷的差异越大分离效果就越好，所以应取两者pI的中

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间值，带正电荷的粒子电泳时向负极移动，带负电荷的粒子电泳时向正极移动。

（1）在pH5.8；（2）在pH8.2；(3)在PH4.9。

14．凝胶过滤是根据分子大小从混合物中分离蛋白质的最有效方法之一，所以又称分子筛。分子大的蛋白质比分子小的先被洗脱下来。根据待分离物质的分子大小，可知被洗脱下来的先后顺序为：肌球蛋白，过氧化氢酶，血清蛋白，胰凝乳蛋白酶原，肌红蛋白，细胞色素C。 15．（1）带有非极性侧链的氨基酸残基： Val， Pro， Phe，Ile。Ile位于分子内部；带有极性侧链的氨基酸残基：Asp，Lys．His。位于分子外部。

（2）因两者的侧链都比较小，疏水性和极性都小：Gly只有一个H+与α一碳原子相连，Ala只有CH2与α一碳原子相连，故它们既可以出现在分子内部，也可以出现在分子外部。

（3）它们在pH7.0时含有不带电荷的极性侧链，参与分子内部的氢键形成，从而减少了它们的极性。

（4）在球蛋白内部可见 Cys，因为Cys常常参与链内和链间的二硫键形成，使其极性减少。

16．凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术．但是其原理和操作两者都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小，将样品中的各种蛋白质分子分开，具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱，小分子的蛋白质进人凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后用洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，大分子先

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被洗脱，然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质；具体操作是将样品装人透析袋然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小分子溶质通过半透膜，蛋白质留在透析袋内。

17．亲和层析是根据配体与受体特异性结合的原理进行大分子物质分离的技术。例如：激素与其相应的受体、抗原与抗体，寡聚尿嘧啶核苷酸（Olig－dU）或寡聚胸腺嘧啶核苷酸（Olig－dT）与带有Poly－A尾巴的mRNA，酶与底物、辅酶和效应物等等，因此采用亲和层桥分离可以得到纯度很高的产品。亲和层析的基本原理和操作是：先把待纯化物质的特异性配基，通过适当的化学反应以共价键的方式与载体琼脂糖连接。为了达到较好的分离效果，常常在载体和配基之间加入连接臂，从而加大载体和配基的距离，防止载体影响大分子的蛋白质、酶以及核酸与配基结合。将制备好的琼脂糖装入层析柱，注人样品，能与配基结合的大分子留在柱内，不能结合的物质通过柱子流出，然后用含与大分子亲和力更强物质的洗脱液将结合在配基上的大分子物质洗脱下来。

18．采用饱和硫酸铵从蛋清中分离卵清蛋白，从胰脏分离各种蛋白质和酶．都是利用盐析法分离蛋白质的典型实例。其原理是大量中性盐的加入，使水的活度降低，使溶液中的自由水与蛋白质分子水化层的水．转变为盐离子的水化水，破坏蛋白质水化层，导致蛋白质沉淀析出。通过盐析作用沉淀的蛋白质保持它的天然构象和活性，再溶解后，可以行使正常的功能。操作时，根据待分离蛋白质盐析浓度的要求。

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配制一定浓度饱和硫酸铵溶液加入样品中，蛋白质就会慢慢析出。例如将蛋清用水稀释，加人硫酸铵至半饱和，其中的球蛋白沉淀析出，除去滤液得到球蛋白，留在滤液中的卵清清蛋白，通过酸化室温静止，过一段时间后，可得到卵清清蛋白晶体。

19．多肽链形成α一螺旋，每个螺旋由3.6个氨基酸残基组成，螺距为5.4nm。相邻的氨基酸之间垂直距离是1.5nm。多肽链形成α一螺旋后的长度是183nm，如果按每个氨基酸残基的平均分子量为120计算，这条多肽的分子量应为：14640。

20．（1）构型和构象：构型（configuration）是指在大分子化合物的立体异构体中，取代原子或基团在空间的取向。构型的改变需要涉及共价键的断裂和生成。不对称碳原子是指与四个不同基团相连的碳原子，含有一个不对称碳原子的化合物有两种不同的构型，含n个不对称碳原子，就有2n个立体异构体。构象（conformation）是指当单键旋转时，分子中的原子或基团形成不同的空间排列，不同的空间排列称为不同的构象，构象的改变不涉及共价键的断裂和生成。 （2）活性肽：是指在生物体内具有各种特殊生物学功能的长短不同的多肽。如Met一

和Leu一脑啡肽为五肽，催产素、加压素和谷胱甘肽等。 （3）ψ角和φ角：由氨基酸残基通过肽键连接形成多肽，两个肽键形成的肽平面之间通过α一碳原子相连。C2α一N1与C2α一C2都是单键，可以绕键轴自由旋转，C2α一N1旋转角度用φ角表示，C2α一C2旋转的角度用ψ角表示。单键顺时针旋转用‘＋’表示，单键逆时针