相切。若不相切，应作一记号为标线，以后此移液管和容量瓶配套使用时就用校准的标线。
为了更全面、详细了解容量仪器的校准，可参考JJG196-920《常用玻璃量器检定规程》。
三、仪器与试剂
1．分析天平，滴定管（50 mL），容量瓶（50 mL），移液管（10 mL），锥形瓶（50 mL，带磨口玻璃塞）。
2．蒸馏水。
四、实验步骤
1．滴定管的校准（称量法）
取一只洗净并且外表干燥的带磨口玻璃塞的锥形瓶，放在分析天平上称量，得空瓶质量m瓶，记录至0.001 g。
再向一洗净的滴定管中装满纯水，将液面调至0.00 mL刻度处，从滴定管向锥形瓶中放出一定体积（记为V０）如5.00 mL的纯水，盖紧塞子，称出“瓶+水”的质量m瓶+水，m瓶+水与m瓶之差即为放出水的质量m水。用上述方法称量表5-14-3 中所列的刻度间的m水，并测量水温，查表5-14-1得该温度下水的密度，即可计算滴定管各部分的实际容量V20。重复校准一次，两次相应区间的水质量相差应小于0.02 g，求出平均值，并计算校准值△V（V20-V0）。以V0为横坐标，△V为纵坐标，绘制滴定管校准曲线。
现将一支50 mL滴定管在水温21℃校准的部分实验数据列于表1。
表1 50 mL滴定管校正表（水温21℃，ρ＝0.99700g·mL）
V0/mL 0.00～5.00 0.00～10.00 0.00～15.00 0.00～20.00 0.00～25.00 …… m瓶+水/g 34.148 39.317 44.304 49.395 54.286 m瓶/g 29.207 29.315 29.350 29.434 29.383 m水/g 4.941 10.002 14.954 19.961 24.903 V20/mL 4.96 10.03 15.00 20.02 24.98 △V校正值/mL -0.04 +0.03 0.00 +0.02 -0.02 -1
移液管和容量瓶也可用称量法进行校准。校准容量瓶时，只需称准至0.01 g即可。
表2 50mL滴定管校正表（水温 ℃，ρ＝ g·mL） V0/mL 0.00～10.00 m瓶/g m瓶+水/g m水/g m水(平均)/g V20/mL △V校正值/mL -1
0.00～20.00 0.00～30.00 0.00～40.00 0.00～50.00 2．移液管和容量瓶的相对校准
取一只洗净且晾干的50 mL容量瓶，用洁净的10 mL移液管移取10mL纯水5次于容量瓶中，观察液面的弯月面下缘是否恰好与刻线上边缘相切，若不相切且间距超过1mm，则用胶布在瓶颈上另作标记，以后实验中，此移液管和容量瓶配套使用时，应以新标记为准。
五、思考题
1．容量瓶校准时为什么需要晾干？在用容量瓶配制标准溶液时是否要晾干？ 2．在实际分析工作中如何应用滴定管的校准值？ 3．分段校准滴定管时，为什么每次都要从0.00 mL开始？
4．试写出以称量法对移液管（单刻线吸量管）进行校准的简要步骤。
实验五 食品中总酸的测定（见课本）
一、酸碱摘定法
1.目的与要求
①了解食品酸度测定的实验原理及意义。
②根据实验结果的分析，简述影响实验准确性的因素。 2.实验原理
食品中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸、草酸、醋酸等有机酸，其电离常数Ka均大于10-8，可以用强碱标准溶液直接滴定试样中的酸，以酚酞为指示剂确定滴定终点。按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。测定结果包括了未离解的酸的浓度和已离解的酸的浓度。
3.仪器与试剂
（1）仪器酸碱滴定装置；分析天平，感量分别为0. 000lg及0.00lg；组织捣碎机；研钵。
（2）实验用水实验用水应符合GB/T 6682规定的二级水规格或蒸馏水，使用前应经煮沸，冷却。
（3）试剂
①Na0H标准滴定溶液 0. lmol/L
②1%酚酞溶液 称取1g酚酞，溶于60mL 95%乙醇中，用水稀释至100mL。 4.实验步骤 （1）样品预处理
①固体样品。取有代表性的固体样品至少200g，用捣碎机捣碎至均匀，置于密闭玻璃容器内。
②固、液样品。取按比例组成的固、液样品至少200g，用研钵或用组织捣碎机捣碎，混匀后置于密闭的玻璃容器内。
③含二氧化碳的液体样品。至少取200g样品至500mL烧杯中，置于电炉上，边搅拌边加热至微沸腾，保持2min，冷却，称量，用煮沸过的水补至煮沸前的质量，置于密闭玻璃容器中。
④不含二氧化碳的液体样品。充分混合均匀，置于密闭玻璃容器内。 （2）测定试液的制备
①液体样品。若总酸含量小于或等于4g/kg，将试样用快速滤纸过滤。收集滤液，用于测定。若总酸含量大于4g/kg，称取10～50g样品，用煮沸过的水定容至250mL，过滤。收集滤液，用于测定。
②固体、半固体样品。称取均匀样品10～50g,精确至0.00lg，置于烧杯中。用约80℃煮沸过的水150mL将烧杯中的内容物转移到250mL容量瓶中，置于沸水浴中煮沸30min（摇动2～3次，使试样中的有机酸全部溶解于溶液中），取出，冷却至室温，用煮沸过的水定容至250mL。用快速滤纸过滤，收集滤液，用于测定。
（3）样品测定
①准确吸取试样滤液25～50mL，使之含0.035～0.07g酸，置于250mL锥形瓶中，加水40～60mL及0.2mL 1%的酚酞指示剂，用0. lmol/L NaOH标准溶液滴定至微红色且30s不褪色。记录消耗0. lmol/L NaOH标准滴定溶液的体积(V1)。同一被测样品须测定两次。
②用水代替样品做空白试验，操作相同。记录消耗NaOH标准滴定溶液的体积(V2)。
（4）实验数据记录见表6-5。
表6-5 数据记录表
项目
滴定时取样体积/mL
第一次
第二次
第三次
平均值
滴定样品消耗NaOH溶液的体积V1 / mL 空白试样消耗NaOH溶液的体积V2 / mL
5.结果计算
X?c(V1?V2)?K?F?100 0 (6-2)
m式中，X为样品中总酸的含量，g/kg（或g/L）；c为NaOH标准滴定溶液的浓度，mol/L； V1为滴定样品时消耗NaOH标准滴定溶液的体积，mL； V2为空白试样消耗NaOH标准滴定溶液的体积，mL； m为样品质量或体积，g（或mL）； F为试样的稀释倍数；K为酸的换算系数：苹果酸0.067、乙酸0.060、酒石酸0.075、柠檬酸0.064、柠檬酸（含一分子结晶水）0.070，乳酸0. 090、草酸0.045、盐酸0. 036、磷酸0. 049。
计算结果精确到小数点后两位。
6.注意事项
①此方法适用于果蔬制品、饮料、乳制品、饮料酒、蜂产品、淀粉制品、谷物制品和调味品等食品中总酸的测定，但不适用于有颜色或浑浊不透明的试样，建议它们改用pH电位法测定。
②对于酸度值较低的食品，测定时可使用0.05mo1/L NaOH标准滴定溶液或0.0lmol/L NaOH标准滴定溶液（用时当天稀释配制）。一般要求滴定时消耗的氢氧化钠标准滴定液不少于5mL，最好在10～15mL。
① 一样品，两次测定结果之差，不得超过两次测定平均值的2%。
② 般情况下，柑橘、柠檬及柚子其总酸以柠檬酸计；葡萄（汁）以酒石酸计；仁果、苹果、桃、李等以苹果酸计；盐渍发酵的制品、肉、鱼、家禽及乳品以乳酸计；醋渍及以醋酸发酵制品，以醋酸计；果汁型固体饮料以结晶水柠檬酸计；菠菜以草酸计。
一、实验目的
实验六 邻二氮菲吸光光度法测定铁
（条件试验和试样中铁合量的测定）
1．学习如何选择吸光光度分析的最佳实验条件。
2．掌握邻二氮菲吸光光度法测定铁的原理及方法。 3．学会绘制吸收曲线和标准工作曲线的方法。 4．掌握分光光度计的结构和使用方法。
二、实验原理
吸光光度法测定铁的理论依据是朗伯一比耳定律。如果固定比色皿厚度，测定有色溶液的吸光度，则溶液的吸光度与浓度之间有简单的线性关系，可用标准曲线法进行定量分析。
采用吸光光度法测定物质的含量时，通常要经过取样、显色及测量等步骤。显色反应受多种因素的影响，为了使被测离子全部转变为有色化合物，应当通过条件试验确定显色剂用量、显色时间、显色温度、溶液酸度及加入试剂的顺序等。本实验在测定试样中铁含量之前，先做部分条件试验，以便初学者掌握确定实验条件的方法。
条件试验的简单方法是：变动某实验条件，固定其余条件，测得一系列吸光度值，绘制吸光度—某实验条件的曲线，根据曲线确定某实验条件的适宜值或适宜范围。
吸光光度法测定铁的含量所用的显色剂较多，有邻二氮菲（又称邻菲啰啉，菲绕林）及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐、5-Br-PADAP等。其中邻二氮菲分光光度法的灵敏度高，稳定性好，干扰容易消除，是目前普遍采用的一种方法。
在pH为2 ~ 9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲（Phen）生成稳定的橘红色络合物Fe(Phen)32+：
2+Fe2++3NNNFe（橘红色）
-1
-1
N3
上述反应的lgK稳＝21.3，摩尔吸光系数ε508＝1.1×104 L·mol·cm。铁含量在0.1~6μg·mL-1符合比尔定律。
3+
而Fe 与邻二氮菲作用形成蓝色络合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原3+2+
剂使Fe还原为Fe，常用的还原剂是盐酸羟胺：
3+2++-2Fe + 2NH2OH·HCl ＝ 2Fe + N2↑+ 4H + 2H2O + 2Cl
2+
测定时，酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则Fe 易水解，因此本文采用pH 5.0~6.0 的HAc-NaAc缓冲溶液，可使显色反应进行完全。
3+22+2++
Bi，Cd+，Hg，Zn及Ag等离子与邻二氮菲作用生成沉淀，干扰测定。实验证实，
2+3+2+2+2+2-3+2+-3-相当于铁质量40倍的Sn，Al，Ca，Mg，Zn，SiO3，20倍的Cr，Mn，VO3，PO4，
2+2+2+
5倍的Co，Ni，Cu等离子不干扰测定。本法测定铁的选择性虽然较高，但选择试样时仍应注意上述离子的影响。
三、仪器与试剂
1．分光光度计，50 mL容量瓶8个（或比色管8支）。
-1
2．铁标准溶液：100μg·mL，准确称取0.8634g 分析纯NH4Fe(SO4)2·12H2O置于200 mL
-1
烧杯中，加入20 mL 6 mol·L HCl溶液和少量水，用玻璃棒搅拌使其溶解，然后定量转移至1 L容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
-1-1
3．铁标准溶液：10μg·mL，用移液管吸取10 mL l00μg·mL铁标准溶液于100 mL容
-1
量瓶中，加入2 mL 6 mol·L HCl溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
-1-1-1
4．邻二氮菲（1.5 g·L），盐酸羟胺（100 g·L，用时配制），NaAc（1 mol·L），NaOH
-1-1
（l mol·L），HCl（6 mol·L）。
四、实验步骤
1．条件实验试验
（1）吸收曲线的绘制
-1
取两个50 mL容量瓶（或比色管），用吸量管分别加入0.0 mL和1.0 mL 100μg·mL铁标准溶液，1 mL盐酸羟胺溶液，摇匀。再加入2 mL 邻二氮菲（Phen），5 mL NaAc溶液，用水稀释至刻度，摇匀。放置10min后，用1 cm比色皿，以试剂空白（即0.0 mL铁标准溶液）为参比溶液，在440~560 nm之间，每隔10 nm测一次吸光度，在最大吸收峰附近，每隔5nm测量一次吸光度。在坐标纸上，以波长λ为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制A-λ吸收曲线。从吸收曲线上选择测定Fe的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax。
（2）显色剂用量的选择
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取7个50 mL容量瓶（或比色管），用吸量管准确吸取1.0 mL 100μg·mL铁标准溶液加入各容量瓶中，然后加入 l mL盐酸羟胺溶液，摇匀。再分别加入0.1 mL，0.3 mL，0.5 mL，0.8 mL，1.0 mL，2.0 mL，4.0 mL Phen和5 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。放置10 min。用1cm比色皿，以蒸馏水为参比溶液，在选择的波长（λmax）下测定各溶液的吸光度。以所取Phen溶液体积V为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制A-V曲线。得出测定铁时显色剂的最适宜用量。
（3）显色时间的选择