A、点样前醋酸纤维薄膜必须用纯水浸泡一定的时间，使处于湿润状态 B、以血清为样品，pH8.6条件下，点样的一端应置于电泳槽的阴极一端 C、电泳过程中保持恒定的电压（90～110V）可使蛋白质组分有效分离

D、点样量太多时,蛋白质组分相互粘联,指印谱带会严重拖尾，结果不易分析 三、是非判断（用“对”、“错”表示，并填入括号中）

1．胰岛素分子中含有两条多肽链，所以每个胰岛素分子是由两个亚基构成（ ）

2．蛋白质多肽链中氨基酸的种类数目、排列次序决定它的二级、三级结构，即一级结构含有高级结构的结构信息。（ ）

3．肽键中相关的六个原子无论在二级或三级结构中，一般都处在一个刚性平面内。（ ） 4．构成天然蛋白质的氨基酸，其D－构型和L－型普遍存在。（ ）

5．变构效应是蛋白质及生物大分子普遍的性质，它有利于这些生物大分子功能的调节。（ ）

6．功能蛋白质分子中，只要个别氨基酸残基发生改变都会引起生物功能的丧失。（ ） 7．具有四级结构的蛋白质，当它的每个亚基单独存在时仍能保持蛋白质有的生物活性。（ ）

8．胰岛素分子中含有A7-S-S-B7，A20-S-S-B19和A6-S-S-A11三个二硫键，这些属于二级结构的内容。（ ）

9．?-折叠是主肽链相当伸展的结构，因此它仅存在于某些纤维状蛋白质中。（ ） 10．在RNase（核糖核酸酶）分子中存在His12、His119侧链的咪唑基及Lys41-NH3由于多肽链是按特定方式折叠成一定空间结构，这三个在一级结构上相距甚远的氨基酸残基才彼此靠近构成RNase的催化中心。（ ）

11．变性后的蛋白质电泳行为不会改变（ ）

12．沉降系数S是蛋白质以及核酸分子量大小常用的表示单位。（ ） 13．调节溶液的pH值对盐析分离蛋白质影响不大。（ ）

14．Folin-酚试剂法测定蛋白质的灵敏度较高，但由于不同蛋白质含有酪氨酸的量不尽相同，会使测定结果往往带来较大偏差。（ ）

15．重金属盐对人畜的毒性，主要是重金属离子会在人体内与功能蛋白质结合引起蛋白质变性所致。（ ）

16．利用蛋白质系数计算粗蛋白含量时对不同的生物样品都一样（即为6.25）。（ ） 17．胰蛋白酶作用时对肽键N-端氨基酸残基的要求是赖氨酸或精氨酸，这种专一性可称为基团专一性。（ ）

18．同源蛋白质中，保守性较强的氨基酸残基在决定蛋白质三维结构与功能方面起重要作用，因此致死性突变常常与它们的密码子突变有关。（ ） O

19．肽平面或酰胺平面是因为－C－NH－结构中 C=0的?电子离域或说是sp2

杂化N的孤对电子与 C=0 P-?共轭后引起的。（ ）

20．有两种蛋白质A和B的等电点分别是6.5和7.2，在pH为8.5的条件下同一静电场中A一定比B向异极泳动速度快。（ ）

21．多肽链出现180°回折的地方会形成转角，其中甘氨酸和脯氨酸常出现在?-转角处，因为其侧链较短，对4→1氢键形成空间位阻小。（ ） 22．苯丙氨酸疏水性比缬氨酸强（ ）

23．由于静电作用，在等电点时氨基酸的溶解度最小（ ）

24．渗透压法、超离心法、凝胶过滤法及PAGE（聚丙稀酰胺凝胶电泳）法都是利用蛋白质的物理化学性质来测定蛋白质的分子量的（ ）

25．当某种蛋白质分子的酸性氨基酸残基数目等于碱性氨基酸残基数目时，此蛋白质的等电点为7.0（ ）

26．蛋白质的亚基（或称为亚单位）和肽是同义词（ ） 四、解释下列名词

1．二面角 2．蛋白质一级结构 3．蛋白质二级结构 4．蛋白质三级结构 5．蛋白质四级结构 6．超二级结构 7．别构效应 8．同源蛋白质 9．简单蛋白质 10．结合蛋白质 11．蛋白质变性作用 12．蛋白质盐析作用 13．蛋白质分段盐析 14．结构域 15．寡聚蛋白 16．构象 17．构型 18．肽单位

19．肽平面 20．?—螺旋 21．?—折叠或?—折叠片 22．超二级结构 23．?—转角 24．蛋白质的变性作用 25．蛋白质的复性作用 26．亚基

五、问答题

1．组成蛋白质的20种氨基酸依据什么分类？各类氨基酸的共同特性是什么？这种分类在生物学上有何重要意义？

2．蛋白质的基本结构与高级结构之间存在的关系如何？ 3．Edman反应所有的试剂和反应的特点如何？

4．何谓蛋白质等电点？等电点时蛋白质的存在特点是什么？ 5．何谓盐析？分段盐析粗分蛋白质的原理是什么？

6．哪些因素可引起蛋白质变性？变性后蛋白质的性质有哪些改变？

7．蛋白质分离分析技术常用的有哪几种，简述凝胶过滤、电泳基本原理。 8．有哪些沉淀蛋白质的方法？其中盐析和有机溶剂沉淀法有何区别或特点？ 9．溴化氰在多肽裂解中的作用部位，和裂解产物的末端氨酸残基为何物？ 10．举例说明蛋白质一级结构与功能关系。 11．举例说明蛋白质变构效应与意义。 12．一样品液中蛋白质组分为A（30KD）、B（20KD）、C（60KD），分析说明用SephadexG100凝胶过滤分离此样品时，各组分被洗脱出来的先后次序。

13．多聚赖氨酸（poly－Lys）在pH7时呈无规线团，在pH10时则呈?－螺旋；而多聚的谷氨酸酸（poly－Glu）在pH7时也呈无规线团，而在pH4时则呈?－螺旋，为什么？ 14．简述胰蛋白酶原激活过程。

15．?－螺旋的特征是什么？如何以通式表示？

16．高浓度的硫酸铵（pH5时）可使麦清蛋白沉淀析出，并用于初步分离该种蛋白的早期步，简要说明其原理。

17．用阳离子交换柱层析一氨基酸混合液（洗脱剂：pH3.25，0.2N柠檬酸钠），其结果如下：①各洗脱峰的面积大小或高度有何含义？②Asp比Glu先洗脱出来的原因？

吸 光 度

洗脱剂流出体积

18．为什么鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂？

六、计算题

1．测得一种蛋白质分子中Trp残基占分子量的0.29%，计算该蛋白质的最低分子量（注：Trp的分子量为204Da）。

2．一种蛋白质按其重量含有1.65%亮氨酸和2.48%异亮氨酸，计算该蛋白质最低分子量。（注：两种氨基酸的分子量都是131Da）。

＋＋

3．某种氨基酸?－COOHpK＝2.4，?－NH3pK＝9.6，?－NH3pK＝10.6，计算该种氨基酸的等电点（pI）。

＋＋

4．某种四肽?－COOHpK＝2.4，?－NH3pK＝9.8，侧链－NH3pK＝10.6侧链－COOHpK＝4.2，试计算此种多肽的等电点（pI）是多少？

5．有一种多肽，其侧链上羧基30个（pK＝4.3），嘧唑基有10个（pK＝7），?－N＋H3（pK＝10），设C末端?－羧基pK＝3.5，N－末端氨基pK＝9.5，计算此多肽的pI。

6．已知氨基酸平均分子量为120Da。有一种多肽的分子量是15120Da，如果此多肽完全以?－螺旋形式存在，试计算此?－螺旋的长度和圈数。

答 案：

一、填空 1. 20 非极性 极性 疏水 亲水 赖 精 天 冬 2.色 苯丙 酪 3. －OH －SH －COOH N NH 4.氨基 紫红 亮黄 5.肽 氢键 二硫键 疏水作用（键） 范德华力 二硫键 6. 谷 缬 极 非极 7.异硫氰酸苯酯 从N-端依次对氨基酸进行分析鉴定 8. ?-螺旋 ?-折叠 ?转角 无规卷曲 氢 氨基酸种类 数目排列次序 中断 9. 分子表面的水化膜 同性电荷斥力 10.溶解度最低 电场中无电泳行为 11.空间结构 二硫 氢 复性 12.正电 负电 13.谷 天冬 赖 精 细

15. b a c

二、选择填空 1.D 2.B 3.C 4.C 5.D 6.A 7.B 8.C 9.C 10.C 11.D 12.D 13.B 14.C 15.C 16.A 17.C 18.B 19.B 20.A 22.B 23.C 24.B 25.B 26.D

三、判断题 1.× 2.√ 3.√ 4.× 5.√ 6.× 7.× 8.× 9.× 10.√ 11.× 12.√ 13.× 14.√ 15.√ 16.× 17.√ 18.√ 19.√ 20.× 21.× 22.√ 六、计算题

1.解：Trp残基MW/蛋白质MW＝0.29%，蛋白质MW＝64138Da。 2.解：异亮氨酸/亮氨酸＝2.48%/1.65%＝1.5/1＝3/2

所以，在此蛋白质中的亮氨酸至少有2个，异亮氨酸至少有3个。由此推理出： 1.65%＝2×（131－18）/蛋白质MW 答案：蛋白质MW＝13697Da。

3.答案：pI＝10.1 4.答案：pI＝7.0

5.解：要计算多肽的等电点，首先应该找到静电荷为零的分子状态。在此多肽中最多可以带有（30＋1）个单位负电荷，而正电荷最多只有（15＋10＋1）个，相差了5个电荷。要想

让正负电荷数相等，只能让30个羧基（侧链－COOHpK＝4.3）少带5个负电荷（?－COOHpK＝3.5，它比侧链－COOH易于解离，难于接受质子），即在30个侧链－COOH中有25个处于解离状态（－COO－），5个不解离（－COOH）。因此： pH＝pKa＋lg（[碱]/[酸]）＝4.3＋lg（25/5）＝5.0。

6.解：答案：肽链长度＝43.92(nm)；该蛋白质（或多肽）分子量＝14640Da 核 酸 一、选择题

1．ATP分子中各组分的连结方式是：

A、R-A-P-P-P B、A-R-P-P-P C、P-A-R-P-P D、P-R-A-P-P E、P-A-P-R-P 2．决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是： A、3′末端 B、T?C环 C、二氢尿嘧啶环 D、额外环 E、反密码子环 3．构成多核苷酸链骨架的关键是：

A、2′，3′－磷酸二酯键 B、2′，4′－磷酸二酯键 C、2′，5′－磷酸二酯键 D、3′，4磷酸二酯键 E、3′，5′－磷酸二酯键 4．含稀有碱基较多的核酸是：

A、核DNA B、线粒体DNA C、tRNA D、mRNA E、rRNA 5．有关DNA的叙述哪项绝对错误：

A、A＝T B、G＝C C、Pu=Py D、C总=C+mC E、A=G，T=C 6．真核细胞mRNA帽结构最多见的是：

A、m7ApppNmP B、m7GpppNmP C、m7UpppNmP D、m7CpppNmP E、m7TpppNmP

7．DNA变性后，下列那一项变化是正确的?

A、对260nm紫外吸收减少 B、溶液粘度下降 C、磷酸二酯键断裂 D、核苷键断裂 E、嘌吟环破裂

8．双链DNA的Tm较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致:

A、A＋G B、C＋T C、A＋T D、G＋C E、A＋C 9．DNA复性的重要标志是:

A、溶解度降低 B、溶液粘度降低 C、紫外吸收增大 D、紫外吸收降低二、

填空题

1．核酸可分为 和 两大类，前者主要存在于真核细胞的 和原核细胞 部位，后者主要存在于细胞的 部位。

2．构成核酸的基本单位是 ，由 、 和 3个部分组成.

3．在DNA和RNA中，核苷酸残基以 互相连接，形成不分枝的链状分子。由于含氮碱基具有 ，所以核苷酸和核酸在 nm处有最大紫外吸收值。

4．细胞的RNA主要包括 、 和 3类，其中含量最多的是 ，分子量最小的是 ，半寿期最短的是 。

5．核外DNA主要有 、 和 。

6．RNA中常见的碱基是 、 、 和 。

7．DNA常见的碱基有 、 、 和 。其中 嘧啶的氢键结合性质类似于RNA中的 。

8．在含DNA和RNA的试管中加入稀的NaOH溶液，室温放置24小时后， 被水解了。

9．核苷中，核糖及脱氧核糖与碱基间的糖苷键是 键。

10．Watson-CrickDNA双螺旋每盘旋一圈有 对核苷酸，高度为 ，直径为 。

11．组成DNA的两条多核苷酸链是 的，两链的碱基顺序 ，其中 与 配对，形成 个氢键， 与 配对，形成 个氢键。

12．由于连接互补碱基的两个糖苷键并非彼此处于对角线的两端，在DNA双螺旋的表面形成较宽的 和较窄的 。

13．维持DNA双螺旋结构的主要作用力是 、 、 。 14．核酸变性时，260nm紫外吸收显著升高，称为 ；变性的DNA复性时，紫外吸收回复到原来水平，称为 。

15．DNA热变性呈现出 ，同时伴随A260增大，吸光度增幅中点所对应的温度叫做 ，用符号 表示，其值的大小与DNA中 碱基对含量呈正相关。

16．DNA在水溶液中热变性后，如果将溶液迅速冷却，则大部分DNA保持 状态，若使溶液缓慢冷却，则DNA重新形成 。

17．稀有核苷?中的糖苷键是 连接。

18．RNA一般以 存在，链中自身互补的反平行序列形成 结构，这种结构与它们间的单链组成 结构。

19．病毒和噬菌体只含一种核酸，有的只有 ，另一些只有 。

20．染色质的基本结构单位是 ，由 核心和它外侧盘绕的 组成，核心由 各两分子组成，核小体之间由 相互连接，并结合有 。

21．tRNA的二级结构呈 型，三级结构呈 型，其3'末端有一共同碱基序列 ，其功能是 。

22．真核 细胞的mRNA帽子由 组成，其尾部由 组成，帽子的功能是 ，尾巴的功能是 。

23．含氧的碱基有烯醇式和酮式两种互变异构体，在生理pH条件下，主要以 式存在，这有利于 形成。

三、是非题

1．DNA是生物遗传物质，RNA则不是。

2．同种生物体不同组织中的DNA，其碱基组成也不同。 3．核小体是构成染色体的基本单位。 4．多核苷酸链内共价键断裂叫变性。

5．DNA的Tm值和A-T含量有关，A-T含量高则Tm高。 6．真核生物mRNA的5'端有一个多聚A的结构。 7．DNA分子含有等摩尔数的A、G、T、C。 8．真核细胞的DNA全部定位于细胞核。

9．B－DNA代表细内DNA的基本构象，在某些情况下，还会呈现A型，Z型和三股螺旋的局部构象。