1%琼脂糖胶的制备 下载本文

1 目的:检验DNA质粒大小或者降解情况。 2 范围:适用于DNA质粒性状初步判断。 3 责任:检验员对本规程的实施负责. 4 内容:

4.1 4.2

仪器装置: DYCP-31E琼脂糖水平电泳仪,微量移液器,水平电泳槽 试剂:1.电泳缓冲液(TAE)

40 mmol/L Tris-乙酸 1 mol/L EDTA

(配制方法:24.2克Tris碱,5.71ml冰乙酸,10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),定容至5000ml)

2. λDNA/HindIII分子量标准(marker,-20℃保存) 3.Goldview—核酸染料 (配置marker 用得上)

4. 1%琼脂糖凝胶溶液

(配制方法:称取琼脂糖1克,加入100ml TAE电泳缓冲液)

4.3

制作过程:

1. 2.

将100ml的1%琼脂糖凝胶溶液,100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀。 取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.

取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子待琼脂糖凝胶冷却至60℃左右时,加入5μL Goldview,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中,琼脂糖凝胶的厚度在3~5mm。倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去。

3.

琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置20分钟,小心拔掉点样梳子保持点

样孔的完好。

4.

取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没

过凝胶2mm.

4.4加样:在点样板上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于

1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).

4.5 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.

4.6拍照:观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存。

5 结果判断

根据marker的大小来初步判断条带的正误,根据条带初步判定质粒是否降解,或者是否单克隆,或者杂带。