基因（分子）诊断：采用分子生物学的方法，在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析，从而对疾病做出诊断的方法。 基因：编码RNA或蛋白质的全部核苷酸序列。 基因组：一个单倍体生物所含有的全部DNA。

基因组学：对所有基因进行基因组作图（包括遗传图谱、物理图谱、转录图谱）、核酸序列分析、基因定位和基因功能分析的一门学科。 结构基因：编码RNA或蛋白质的核苷酸序列。 补充：

假基因：与具有正常功能的基因序列相似，但无转录功能或转录产物无功能的基因。

基因家族：一组功能相似且核苷酸序列具有同源性的基因，可能由某一共同祖先经重复和突变产生，这一组基因即是~。其编码的同源蛋白称为蛋白质家族，具有相似的功能。

【小知识点】

可用于蛋白质分析与鉴定的技术

（一）分离：二维凝胶电泳:由两相组成：

第一相：等电聚焦凝胶电泳， (根据蛋白质电荷差异),

第二相：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，(根据蛋白质分子量差异)分离蛋白质。 ①等电聚焦凝胶电泳；②SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；③图像分析技术 （二）鉴定

①质谱技术；②Edman降解；③分子结构分析

补充：【小知识点】 核酸的鉴定和保存

（一）核酸含量鉴定：有紫外分光光度法和荧光光度法

①紫外分光光度法：在波长260nm左右的紫外光下的读数可用来计算样品中核酸的浓度，每1μg DNA钠盐的吸光度值为0.02，即A260=1时。双链DNA含量为50μg/ml，单链DNA或RNA含量为40μg/ml，单链寡核苷酸含量为33μg/ml ②荧光光度法 （二）核酸纯度测定

①紫外分光光度法：纯DNA的A260/A280比值为1.8，比值较高说明有RNA污染，比值较低说明有残余蛋白质。A260/A280比值为2.0是高质量RNA的标志，但一般在1.8~2.1之间都可以接受。A230/A260的比值应在0.4~0.5，若比值较高说明有残余盐存在。

②荧光光度法：RNA变性电泳后可呈现特征性的三条带，原核生物表现为明显可见的23S、16S、5S的rRNA条带，真核生物则由28S、18S的rRNA及5S、5.8S的rRNA和tRNA构成。 （三）核酸完整性鉴定：一般28S（或23S）RNA的荧光强度约为18S（或16S）RNA的2倍，否则提示RNA降解；若加样槽附近有着色条带，则说明有DNA的污染。 （四）核酸的保存

一般将DNA保存于pH8.0的TE缓冲液中，在-70℃可储存5年以上，加入少量氯仿可避免细菌的污染。

以焦碳酸二乙酯水溶解RNA或者在RNA溶液中加入RNA阻抑蛋白等RNA酶抑制剂可延长保存时间；另外RNA以沉淀形式长期保存于70%的乙醇溶液或去离子的甲酰胺溶液中（-20℃）

补充：【小知识点】

酚抽提法提取基因组DNA中各试剂的作用

EDTA为二价金属离子螯合剂，可抑制DNA酶的活性，同时还能降低细胞膜的稳定性； SDS为阴离子去污剂，能引起细胞膜降解，乳化脂质和蛋白质并沉淀，同时还有降解DNA酶的作用；

（无DNA酶的）RNA酶：可有效水解RNA；

蛋白酶K起水解蛋白质的作用，可消化DNA酶、DNA上的蛋白质，同时也有裂解细胞的作用。 酚是很强的蛋白质变性剂，也可抑制DNA酶活性；氯仿能加速有机相和水相的分离； 异戊醇则可减少在抽提过程中由于蛋白变性产生的大量气泡。

pH8.0的Tris可使DNA顺利进入水相，避免滞留于蛋白层。 70％乙醇洗涤（除去共沉淀的盐和有机分子）

朊病毒：一种相对分子质量约为27KD的蛋白质（不含核酸），是引起羊瘙痒病的病原体。 基因表达：是指DNA携带的遗传信息通过转录传递给RNA，mRNA通过翻译将基因的遗传信息在细胞内合成具有生物功能的各种蛋白质的过程。（有转录、翻译、调节环节，以转录层次的调节最为重要）

基因表达调控：指对基因组中某一基因或一些功能相近的基因表达的开启、关闭和表达强度的直接调节。

开放阅读框（ORF）：始于起始密码子并终于终止密码子的一串密码子组成的核苷酸序列。 内含子：DNA或RNA中的非编码序列。 外显子：DNA或RNA中的编码序列。

启动子：与RNA聚合酶识别、结合和转录起始所需的DNA序列。

SD序列：mRNA 5′-端在起始密码子AUG 上游 3~11bP处，含A-G 短序列，容易与16 Sr RNA 3′-端含U-C 序列互补配对的序列称为SD 序列。

操纵子：由一组功能相关的结构基因连同其上游调控序列共同构成一个转录单位。 重叠基因：一段DNA序列有两个或两个以上ORF，可以编码两种或两种以上多肽链。

质粒：细菌细胞(类核)染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状DNA分子。 【小知识点】质粒DNA通常具有三种构型：超螺旋DNA、线性DNA分子、半开环DNA分子。在琼脂糖凝胶电泳时，其泳动速度由快到慢依次为：超螺旋＞线性＞半开环

断裂基因：基因组由编码序列和非编码序列间隔组成。 重复序列：多拷贝的相同或近似DNA片段。

分段基因组：病毒基因组由数条不同的核酸分子组成，多见于RNA病毒。

正链病毒：基因组序列与mRNA相同，称为正链DNA(+DNA)或正链RNA(+RNA)病毒。 负链病毒：基因组序列与mRNA互补，则称为负链DNA(-DNA)或负链RNA(-RNA)病毒。

重组DNA：不同来源的DNA，通过磷酸二酯键连接而重新组合成新的DNA分子的过程。 重组DNA技术：在基因水平上，将目的DNA在体外重组于能自我复制的载体DNA分子上，然后将重组DNA导入宿主细胞中进行增生，以获得大量的DNA片段或得到相应的蛋白质产物的过程。

限制性核酸内切酶：识别和切割双链DNA分子特异序列的核酸水解酶。 粘性末端：指限制酶错位切开两条对称轴互补DNA双链所产生的末端。 平末端：指限制酶平齐切开两条对称轴互补DNA双链所产生的末端。 回文结构：指双链DNA分子上按对称轴排列的反向互补序列. 载体：携带目的DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。 多克隆位点（MCS）：指具备多个限制酶的单一识别位点。

克隆载体：能够携带目的DNA片段进入宿主细胞进行扩增获得大量目的DNA的一类DNA分子。

表达载体：能够携带目的DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达，获得目的DNA蛋白质产物的一类DNA分子。

增强子：能加强其上游或下游基因转录的DNA序列 。

遗传密码：mRNA上按5’到3’方向排列的每三个核苷酸称遗传密码。 多顺反子：一个结构基因转录产生一条mRNA ,编码几条功能相关的多肽链。 单顺反子：一个结构基因转录产生一条mRNA ,编码一条多肽链的生成。 顺式作用元件：凡能激活或阻遏基因转录的DNA序列。

反式作用因子：与顺式作用元件直接或间接相互作用，能调节基因转录活性的蛋白质因子。 基因组文库：是指含有某种生物全部基因随机片段的重组DNA克隆群。

cDNA文库：mRNA经逆转录酶催化生成cDNA后，再将这些cDNA装入载体构建成的含各种cDNA克隆的克隆群。

T-A克隆：Taq DNA聚合酶在扩增目的DNA的同时能不依赖模板在扩增产物两端加上两个游离的“A”,与切口处人工加上游离的“T”的载体即T载体连接,这种克隆方式称T-A克隆。 定向连接：使外源DNA片段定向插入到载体分子中的克隆方案。

感受态细胞：细胞膜结构改变、通透性增加并具有摄取外源DNA能力的细胞。

转化：将质粒或以质粒为载体的重组DNA分子导入细菌，使其在细菌体内扩增及表达的过程。

补充：比较病毒/原核/真核生物基因组的特征 核酸 基因组大小 病毒 DNA或RNA 基因数少 不同病毒基因组大小和数目差异大 结构基因特征 5‘帽子和3’尾巴 粘性末端 重叠基因 分段基因组 其他特征 双链DNA分子两端 有正向/反向 重复序列 多顺反子mRNA 无内含子，操纵子 编码序列不重叠 环状双链DNA 单顺反子mRNA 断裂基因 非编码区多于编码区 重复序列 线状双链DNA 原核 DNA和RNA 基因数目较少 真核 DNA和RNA 基因数目较多 仅一个DNA复制起点 二倍体 仅有类核结构