沉降菌测试

1. 目的

本程序规定了洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。 2. 范围

本程序适用于洁净室和洁净区、无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。 3. 引用文件

3.1. GB/T 16294－1996医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法 3.2. YY/T 0188.6－1995药品检验操作规程，第6部分：药品生物测定法 3.3. 药品生产质量管理规范（1998年修订） 3.4. 中国药典2000年版 4. 职责

质保室中控人员。 5. 测试方法

5.1. 方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养

基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌能进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 5.2. 所用的仪器和设备

5.2.1. 高压消毒锅 使用时应严格按照仪器说明书操作。 5.2.2. 恒温培养箱 必须定期对培养箱的温度计进行检定。 5.2.3. 培养皿 一般采用?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。

5.2.4. 培养基 营养肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A。 5.3. 测试步骤

5.3.1. 采样方法：将已制备好的培养皿按6.4.1.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴

露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。

5.3.2. 培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中，在30~35℃培养不少于48h；每

批培养基应选定3只培养皿作对照试验，以检验培养基本身是否污染。

5.3.3. 菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，

有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

5.4. 注意事项

5.4.1. 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 5.4.2. 采取一切措施防止人为对样本的污染。 5.4.3. 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

5.4.4. 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不

要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

5.4.5. 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 6. 测试规则 6.1. 测试状态

6.1.1. 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、

空气流速必须控制在规定值内。

6.1.2. 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。

6.1.3. 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测

试状态。

6.2. 测试人员

6.2.1. 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 6.2.2. 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 6.3. 测试时间

6.3.1. 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于

10min后开始。

6.3.2. 对非单向流，如10,000级、100,000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运

行不少于30min后开始。

6.4. 沉降菌计数

6.4.1. 采样点数目及其布置

6.4.1.1. 最少采样点数目：沉降菌测试的最少采样点数可按表1确定。

表1 最少采样点数目

面积m2 ＜10 ≥10~＜20 ≥20~＜40 ≥40~＜100 ≥100~＜200 ≥200~＜400 ≥400~＜1000 ≥1000~＜2000 2000 室，是指房间面积。 在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。

表2 最少培养皿数

洁净度级别 100 10,000 100,000 所需?90mm培养皿数（以沉降0.5 h计） 14 2 2 洁净度级别 100 2~3 4 8 16 40 80 160 400 800 10,000 2 2 2 4 10 20 40 100 200 100,000 2 2 2 2 3 6 13 32 63 注：表中的面积，对于单向流洁净室（包括层流工作台），是指送风面积，对于非单向流洁净6.4.1.2. 采样点的位置：采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。详细规则见附录B。

a) 工作区采样点的位置离地面0.8~1.5m左右（略高于工作面）。 b) 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

6.5. 记录

沉降菌测试报告见附录C。测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。 6.6. 结果计算

6.6.1. 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 6.6.2. 平均菌落数为各培养皿菌落数的算术平均值。 6.7. 结果评定

6.7.1. 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。

6.7.2. 若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重

新采样两次，测试结果均须合格。

7. 附录

7.1. 附录A 培养基的准备及灭菌

7.1.1. 培养基的准备：培养基可以外购或自行配制。自行配制方法见YY/T 0188.6－1995第6

章无菌检查部分中关于此类培养基的配方的操作步骤。其他符合药典灵敏度要求的培养基也可以自行配制。营养肉汤琼脂培养基的配制方法为： 胨 氯化钠

10g 5g

肉浸液 琼脂

1000ml 15~20g

取胨、氯化钠及琼脂，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。

7.1.2. 培养基平皿的制备

7.1.2.1. 将?90mm的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。

7.1.2.2. 将培养基加热溶化，稍放冷后，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 7.1.2.3. 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30~35℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上

确无菌落生长，即可供采样用。

注：制备好的培养基平皿宜在2~8℃的环境中存放。 7.2. 附录B 采样点布置

洁净室和洁净区采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。下列采样点布置的图示可作参考。

注：·为采样点。 7.3. 附录C 沉降菌测试报告

编 号：_____________________________ 测试单位：_____________________________ 测试依据：_____________________________ 测试状态：_____________________________ 环境温度：___________________________℃ 相对湿度：___________________________％ 培养基批号_____________________________ 培养温度：___________________________℃ 检测日期：_____________________________ 静 压 差：___________________________Pa 报告日期：_____________________________ 菌落数 平皿 区域 1 2 3 4 5 6 平均数 级别 备注 评定标准：_____________________________ 结 论：_____________________________ 检 验 人：_____________________________ 复 核 人：_____________________________