pda培养基的配制方法流程 下载本文

1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基) 马铃薯(去皮)200g 葡萄糖20g 琼脂20g 水1000mL pH值自然

PDA培养基配制注意事项

1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。

2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。

4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.2g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性。 15:49:27

太珥日 2016-4-26 15:49:27

PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即

Potato Dextrose Agar (Medium),分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。它属于固体培养基、半合成培养基。PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势,一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。

PDA培养基的配制

(1)称量和熬煮

按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解

把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。

(3)分装

按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

(4)加棉塞

培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。

(5)包扎

加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

母种培养基的配制

同一种菌类培养基的配方虽然有多种多样,但必须含有各种菌丝生长所需要的养分、水分和适宜的酸碱度。马铃薯、葡萄糖、琼脂作为各类母种的培养基最为普遍,菌丝都能正常生长。现将常用的培养基配方和配制方法举例介绍。

1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)

马铃薯(去皮):200g

葡萄糖:20g

琼脂:20g

水:1000mL

pH值:自然

2.马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA培养基)

马铃薯(去皮):200g

蔗糖:20g

琼脂:20g

水:1000mL

pH值:自然

以上两种培养基广泛应用于各种菇、耳、猴头类食用菌的培养。其具体制作方法是:将200g马铃薯去皮,去芽眼,切成小条放入铝锅中,加入1000mL水,煮沸20~30分钟左右至马铃薯软而不烂时,用6~8层纱布过滤,取滤汁于锅中,补水至1000mL,加入琼脂熔化,再加入糖搅拌均匀,趁热分装于试管中。