SOP标准操作程序

葡萄糖（货号：OSR6121，OSR6221）

实验原理：

血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）1。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发的，低血糖，郎格罕氏岛细胞癌科。

葡糖尿（存在含尿的葡萄糖）在健康，怀孕的妇女中很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中一个显著的变化10。

脑脊髓液（CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎中的细菌；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（同时分析，平衡血清葡萄糖不到40%到50%），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF葡萄糖值在正常值以下。

方法

Stein首先介绍已糖激酶G-6-PDH方法测定血清或血浆中的葡萄糖。一些研究已经证明该方法的准确性和有效性。

2，3，4，5

在奥林巴斯AU640程序中，葡萄糖在三磷酸腺苷（ATP）和镁离子存在的情况下被已糖激酶（HK）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和二磷酸腺苷（ADP）。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）使G-6-P氧化为6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原（NADH）。在340/380nm的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。

HK

葡萄糖 + ATP -------------﹥G-6-P+ ADP Mg2+

G6PDH

G-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+

标本：

病人准备：优先选用12小时禁食的病人。 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离红血球，减少糖解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。

标本稳定性：血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时6。氟化物保护的血浆在25℃下可稳定24个小时，尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。

脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。

仪器与材料:

仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪 材料：奥林巴斯AU640 葡萄糖

参与反应成份的最终浓度：

PIPES缓冲液（pH7.6） 24.0mmol/L ATP ≥2.0 mmol/L NAD+ ≥1.32 mmol/L Mg2+ 2.37 mmol/L 已糖激酶 ≥0.59 kU/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 ≥1.58kU/L 其中含有保护剂。

注意：1. 此试剂为体外诊断用。

2. 不要入口，吞下有害。

3. 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠

氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。 试验用试管的直径在12～16mm。

定标液：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）

试剂准备：奥林巴斯AU640的葡萄糖是即开即用的。无需特殊准备。 执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640葡萄糖试剂已经建立的程序。 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型方法9，AU640批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 血清：

N=100 平均值（mg/dL） 59 115 258 尿：

N=100 平均值（mg/dL） 31 313 批 内 SD 0.2 1.0 精 密 度 CV% 0.6 0.3 总 精 SD 0.3 3.3 密 度 CV% 1.0 1.1 批 内 SD 0.4 0.5 1.0 精 密 度 CV% 0.7 0.5 0.4 总 精 SD 0.9 1.5 3.8 密 度 CV% 1.6 1.3 1.5 方法学比较：

血清：奥林巴斯AU640 葡萄糖（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做180个病人标本。相关系数达到1.000，回归方程如下： 葡萄糖方法1=（葡萄糖方法2×0.986）+0.4 病人结果数值分布： 10～644 mg/dL

尿：奥林巴斯AU640 葡萄糖尿（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做96个病人标本。相关系数达到0.9997，回归方程如下： 葡萄糖方法1=（葡萄糖方法2×0.996）+0.8 病人结果数值分布： 2～1099 mg/dL

敏感度：在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化2.0毫吸光度为1 mg/dL。 试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。

2.开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

校准：

标准液的准备：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）。奥林巴斯定标液是即开即用的，无需特殊准备。

校准程序：每30天需要定标一次。葡萄糖定标程序用奥林巴斯定标物，可追踪到全国科学技术学会（NIST）标准参考材料（SRM）909b1&b2。 当有以下情况时需要重新定标：

1． 换试剂批号或出现质控漂移时。 2． 当仪器做完保养后。 3． 重要零件更换时。

质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控血清（DR0061&62）作为未知标本

进行分析。

操作程序（逐步地）： AU640开机

1.确认两瓶清洗剂有足够的量。 2.打开蒸馏水供应系统的阀门。

3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWER ON]键。 4.确认打印机为开机并处于联机状态。

5.在[Start Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。 6.如果要求输入密码，请输入密码。

7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。

8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。 9. ISE（电极）需要以下步骤定标：

a.在急诊台相应位置放血清/尿高和低值标准液。 b.在系统状态菜单选择ISE状态菜单。 c.选择F5，选定合适的定标条目。

d.定标完成后，确认斜率和因数是否在范围内。

开始分析:

1.把定标、质控、和标本架放在架子传送带上。

2.用鼠标点击屏幕最上方的[START ANALYZER]图标。 3.点击F2退出键，退回到主屏幕。 分析参数 血清：

样品体积 2微升 稀释水 0微升 试剂1体积 50微升 稀释水 150微升 试剂2体积 25微升 稀释水 25微升 波长 340/380 方法 End 读点 0/27 温度 37℃ 尿：

样品体积 3微升 稀释水 0微升 试剂1体积 50微升 稀释水 150微升 试剂2体积 25微升 稀释水 25微升 波长 340/380 方法 End 读点 0/27 温度 37℃