动相中与离子对试剂的反离子生成不带电荷的中性离子对，从而增加溶质与极性固定相的作用，是分配系数增加，改善分离效果。 用于分离可离子化或离子型化合物。

③离子抑制色谱：将流动相介入少量弱酸，弱碱或缓冲溶液，调节流动相ph，抑制有机弱酸弱碱的离解，增加它与固定相的作用，达到分离的目的。 6、什么是柱外效？在色谱中引起柱外效应的因素有哪些？如何抑制柱外效应？ 答：色谱法峰在柱外死空间里的扩展效应。

造成因素：进样器，检测器和各种连接管中的死体积。

如何抑制柱外效应：尽量减小连接管的长度，并采用细内径的管线为连接线。采用死体积小的检测器。

7、HPLC中定量分析的依据是什么？为什么要引入定量校正因子？常用的定量方法有哪些？哪些需要校正因子，哪些些不需要。

答：定量依据：响应信号（峰面积或峰高）与进入检测器的被测组分的含量成正比。

同一检测器对不同组分有不同的响应值。因此相同质量的不同组流出检测器是有不同的响应值，因此不能直接用峰面积计算组分含量，需要引入校正因子。 常用的定量方法有归一化法，需要校正因子；外标法，不需要校正因子；内标法，需要校正因子。

8、列出反相色谱中常用的固定相和流动相以及反相色谱法对流动相的基本要求。 答：常用固定相：非极性固定相，如十八烷基键合相ODS。

常用流动相：甲醇—水，乙腈—水等多元溶剂混合体系。可调节ph、

对流动相基本要求：①于是混合的有机溶剂应能与水以任意比例互溶。② ph必须控制在2~8；③ 若采用紫外检测器，流动相鹦鹉紫外吸收；④纯净，使用前应用0.45um滤膜过滤，脱气。

11、什么叫梯度洗脱，与GC的程序升温有何异同？

答：梯度洗脱：在一个分析周期内，程序控制改变流动相组成，如溶剂的极性，ph等的方法。分析组分数多，性质相差较大的复杂时采用梯度洗脱。

程序升温：在一个分析周期内程序改变柱温。使不同沸点组分在合适的温度下得到分离。

同：两种方法都可用于分析复杂样品，使所有组份在适宜条件下得到分离。缩短分析时间，改善分离度，改善峰形。

异：梯度洗脱连续改变的是流动相的极性，ph等，程序升温改变的是温度。 9、高效液相色谱仪

答：①输液系统：a高压输液泵输送。为了延长泵使用寿命，维持其输液稳定性，操作时应注意：防止任何固体微粒进入泵体；流动相不含有任何腐蚀性物质；泵工作时要防止溶剂瓶内流动相被用完；不要超过规定的最高压力，否则高压密封环变形产生漏液；流动想要脱气。b梯度洗脱装置：

③分离进样系统：a进样器：将试样送入色谱柱，一般要求进样装置的密封性好，死体积小，重复性好。b色谱柱：色谱仪的最重要部件，由管柱和固定相组成。 ③检测系统： 检测器：把色谱洗脱液中的组分的量转变成电信号。常用 ：紫外检测器。

④数据处理，控制系统。

10、反相键合相色谱法保留行为的主要影响因素

答：（1）溶质的分子结构（极性）：极性越弱，疏水性越强，k越大，tR也越大。

（2）固定相：键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶质的k也增大。硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的k越大。

（3）流动相：极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k越大 11、高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择 答：（1）固定相应符合下列要求： ①颗粒细且均匀； ②传质快；

③机械强度高，能耐高压；

④化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。 （2）对流动相的要求： ①与固定相不发生化学反应。

②对试样有适宜的溶解度。使k在1~10范围内，

③与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂。

④纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇﹑乙腈等可以降低柱压，提高柱效。 12、紫外检测器

答：检测原理：朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl

特点：灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。

局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。 专属型、浓度型检测器 第十八章 平面色谱法 1、平面色谱法分类、原理 答：（1）薄层色谱法： ①吸附薄层色谱法：

原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。吸附系数不等实现分离。

一般极性强的组分K大，Rf值小；极性弱的组分 K小，Rf值大。 ②分配薄层色谱法：

原理：多次分配的过程，分配系数（溶解度）不等实现分离

正相色谱：水为固定相（硅胶载体），有机溶剂为流动相。极性强的组分K大， Rf值小。

反相色谱：烷基化学键合相为固定相，水－有机溶剂为流动相。极性强的组分K小， Rf值大。 ③分子排阻薄层色谱法 （2）纸色谱法:分配

纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相，依据分配系数的不同而达到分离 （3）薄层电泳法

2、衡量薄层色谱的参数及其意义。

3、硅胶上的活性基团是什么？以及其影响因素是什么？ 答：活性基团是硅醇基。

影响因素是含水量，含水量越高，活性越小。

4、吸附色谱中，欲使被分离极性组分Rf值变化小，可采用那些方法？ 答：①增加吸附剂活性：活化时，提高活化温度，延长活化时间，是吸附剂含水量减少，活化提高。

②降低展开剂极性：选择记性更弱的有机溶剂或降低混合溶剂中的极性溶剂比例。对于有酸碱性的组分，改变或调节展开剂ph也可使组分比移值减小。 5、利用Rf定性依据是什么？

答：由于组分不同，热力学常数k也不同，在平面色谱上的比移值也不同，所以平面色谱可以把不同的组分分离出不同的斑点。在一定的色谱条件下，某一组份比移值是一定值，可以根据试样与对照品比移值比较进行定性。 6、利用相对比移值定性有什么优点？

答：一定程度上消除了测定总的系统误差，比比移值有更高的重现性和可比性。 7、从分离原理看，TLC一般属于什么色谱？TLC中流速是否恒定？说明影响流速的因素

答：从原理来看，属于吸附色谱。

TLC中流速是不恒定的，越往上，展开越慢。影响流速的因素有吸附剂颗粒，流动相黏度，展开温度，展开距离等。 第十九章 毛细管电泳法

1、试说明毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱的异同

答：毛细管区带电泳是利用被分离离子在电厂作用下移动速率不同而实现分离的一种高效分离技术。毛细管电解质溶液的移动时电渗引起的。该法只适合于离子或可电离物质的分离。

胶束电动毛细管色谱是在毛细管区带电泳的基础上派生出来的一种高效分离技术。在毛细管区带电泳的缓冲溶液中添加浓度高于胶束临界浓度的表面活性剂，使其成为胶束相；因此被分离对象在电场作用下的移动速度不仅取决于电渗和自身电泳，而且与他们在胶束相与水相之间分配系数有关。此法可适用于离子，可点礼物只集中性化合物的分离。 2、如何选择毛细管取代电泳的条件？

答：①分离电压：若用毛细管很细或缓冲溶液的电导很低，最佳电压可能是超出仪器范围，此时可选择一起允许的最大输出电压。当毛细管较粗或缓冲溶液电导较高时，最佳电压可能很小，若此时分离度很高，也可选择最佳值的电压进行分

离。

②缓冲溶液的种类：a 在所选择的ph范围内有足够大的缓冲容量；b检测波长处吸收低；c自身淌度低；d 应使被测组分待何时电荷量；e尽可能采用酸性缓冲溶液用；f 与毛细管种类匹配。

③ 缓冲溶液浓度：浓度增大，改善分离，迁移时间延长，焦耳热增加。通常，缓冲溶液的浓度控制在10~200mmol/L

3、毛细管电泳过程中，为什么阴阳中性离子均想一个方向移动？

答：多数溶液中，石英玻璃表面因硅羟基离解产生负电荷，许多有机菜连夜因残留的羧基产生负电荷，其结果是产生指向负极的电渗流。因此埋在通常的买习惯去带点用条件下，电渗流从阳极流向阴极，大小受电场强度，Zeta电视，双电层厚度和介质粘度的影响。一般情况下，电渗速率是点用速度的5~7倍，因此，不管是正离子，负离子还是中性离子，都随电渗流朝一个方向移动。 4、能否通过物理或物理化学方法，使电渗流的迁移改变或方向改变？ 答：加入阳离子表面活性剂

当溶液中含有阳离子表面活性剂时，由于静电作用，带电荷端被吸附在管壁，使管壁负电荷减少，随着阳离子表面活性剂浓度增加，电渗流减小，直至为0，继续甲表面活性剂，则使管壁表面带正电荷，电渗流反转。 5、提高毛细管电泳柱效的措施有哪些？

答：根据毛细管电泳分离柱效方程，可知提高住校的措施有

①增大分离电压V；②在V不变的情况下，有效柱长与总长之比越大，柱效越高；③溶质的扩散系数D越小，分离柱效越高。 6、影响毛细管电泳谱带展宽的主要因素有哪些？ 答：①分子扩散：谱带前后存在浓度差，导致分子扩散。

②自热：毛细管两端加电压后产生焦耳热，由于散热不均匀，在毛细管中存在温度径向梯度，导致缓冲液的径向粘度梯度，因而产生离子迁移速度的径向不均匀分布，破坏了区带电泳的扁平流轮廓，导致取代展宽。

③吸附：毛细管管壁对于被分离物质粒子的作用，试管壁附近的溶质迁移，速度小于管中心的溶质，从而导致谱带展宽。

7、高效毛细管电泳为什么能实现高效和高速分离？