实验六 维生素C注射液的制备及稳定性

一、实验目的

1. 掌握注射剂的生产工艺过程和操作要点。

2. 掌握影响维生素C注射液稳定性的主要因素及稳定化方法。

二、实验原理

注射剂又称针剂，系将药物制成供注入体内的无菌制剂。注射剂按分散系统可分为四类，即溶液型注射剂、悬型注射剂、乳剂型注射剂、注射用无菌粉末（无菌分装及冷冻干燥。根据医疗上的需要，注射剂的给药途径可分为静脉注射、脊椎腔注射、肌肉注射、皮下注射和皮内注射五种。由于注射剂直接注入人体内部，故吸收快，作用迅速，为保证用药的安全性和有效性，必须对成品生产和成品质量进行严格控制。 注射剂的工艺流程：

以溶液型注射剂制备过程为例，其工艺流程如下，

图1 溶液型注射剂的一般制备工艺

注射剂的质量要求：

一个合格的注射剂必须是澄明度合格、无菌、无热原、安全性合格（无毒性、溶血性和刺激性）、在贮存期内稳定有效，pH值、渗透压（大容量注射剂）和药物含量应符合要求。注射液的pH值应接近体液，一般控制在4～9范围内，特殊情况下可以适当放宽，如磺胺嘧啶钠注射液的pH值为9.5～11.0，葡萄糖注射液的pH值为3.2～5.5，葡萄糖氯化钠注射液的pH值为3.5～5.5，注射用奥美拉唑的碱度范围为pH9.0～11.5。具体注射剂品种的pH值的确定主要依据以下三个方面，首先是满足临床需要，其次是满足制剂制备、贮藏和使用时的稳定性，最后要满足人体生理可承受性。凡大量静脉注射或滴注的输液，应调节其渗透压与血浆渗透压相等或接近。凡在水溶液中不稳定的药物常制成注射用灭菌粉末即无菌冻干粉针

或无菌粉末分装粉针，以保证注射剂在贮存期内稳定、安全、有效。

为了达到上述质量要求，在注射剂制备过程中，除了生产操作区符合GMP要求、操作者严格遵守GMP规程外，药物、附加剂及溶剂等均需符合注射用质量标准，其处方必须采用法定处方，其制备方法必须严格遵守拟定的产品生产工艺规程，不得随意更改。

维生素C又叫抗坏血酸。其分子结构中，在羰基比邻的位置上有两个烯醇基，很容易被氧化。在有氧和无氧条件下都可以被氧化。影响维生素C溶液稳定的因素很多，例如氧气，PH值，金属离子，温度及光线等，对固体维生素C，水分与湿度影响很大。维生素C的不稳定性主要表现在放置过程中颜色变黄和含量下降。

三、仪器与试剂

仪器:可见分光光度计,pH计,水浴锅,电炉,量瓶等。

材料:维生素C,碳酸氢钠,焦亚硫酸钠，注射用水,硫酸铜,依地酸二钠等。

四、实验步骤

1. 5%维生素C注射液的制备

取注射用水500ml煮沸，放冷至室温，备用。取维生素C 20g，加放冷至室温的注射用水溶解并稀释至500ml制成5%的维生素C注射液，备用。取样进行含量测定，同时测定注射液在420nm处的吸收度，作为0时的含量及吸收度。 2．影响维生素C注射液稳定性因素 1.pH的影响

（1）pH值对维生素C注射液稳定性的影响

取（1）中制备的注射液400ml分成4份（容器应干燥），分别为50、50、250和50ml，用NaHCO3粉末调节pH至4.0，5.0，6.0，7.0。用微孔滤膜过滤，用注射器将上述溶液分别灌入2ml安瓿中，每个pH值溶液灌装8支。用皮套捆扎后同时放入100℃水浴中加热1h，观察不同时间溶液颜色变化，按表1以+++…表示颜色变化进行记录，测定1h时测定注射液的吸收度。

（2）空气中氧的影响

取（1）中制备的pH6的5%维生素C注射液100ml，分成3份（容器应干燥）：①于2ml安瓿灌装2ml后熔封，共灌8支；②于2ml安瓶灌装1ml后熔封，共灌12支；③于2ml安瓶灌装2ml后，通入N2（约5秒），立即熔封，共灌8支。分别标记样品后，放入100℃水浴中加热1h，照（1）中所述方法观察不同时间溶液颜色变化，按以+++…表示颜色变化进行记录，测定1h时测定注射液的吸收度。考察不同含氧量对维生素C稳定性的影响。 （3）抗氧剂的影响

取（1）中制备的pH6的维生素C注射液100ml，分成2份，每份50ml（容器应干燥）。第一份中加入Na2S2O50.12g使溶解，第二份作对照。将上述两份溶液分别灌于2ml安瓶中，每份

8支，分别标记后，同时放入100℃水浴中加热 1h，照（1）中所述方法观察不同时间溶液的变化，按以+++…表示颜色变化进行记录，测定1h时注射液的吸收度。考察抗氧剂对维生素C稳定性的影响。

（4）金属离子与金属离子络合剂的影响

取维生素C 5g，加入放冷至室温的注射用水40ml溶解，用NaHCO3粉末调节pH至6.0并稀释至50ml制成10% 的维生素C溶液，分成2份，每份25 ml。一份中加入0.0001 mol/L CuSO4溶液12.5 ml及5% EDTA-2Na溶液2.5 ml，加水至50ml；另一份中加入0.0001 mol/L CuSO4溶液12.5 ml，加水至50ml。将上述两份溶液分别灌装于2ml安瓿中（灌装2ml药液），每份10支。分别标记样品后，放入100℃水浴中加热1h，照（1）中所述方法观察不同时间溶液颜色变化，按以+++…表示颜色变化进行记录，测定1h时测定注射液的吸收度。考察金属离子及金属离子络合剂对维生素C稳定性的影响。

图2 实验操作流程图

五、实验结果

维生素C注射液稳定性影响因素考察结果

颜色变化 样品号 样品条件 0 min 1 2 3 10 min 20 min 30 min 45 min 60 min 吸光度 （420nm） 4 5 6 7 8 9

六、补充内容 （一）预习内容

1、维生素C注射液在放置过程中为什么会产生颜色的变化，其分解产物具体有哪些？ 2、本实验为什么选择分光光度法进行颜色检查？检测波长选择420nm处有何依据？ 3、本实验选择碳酸氢钠调节维生素C注射液pH的依据以及临床作用，加入碳酸氢钠过程中应注意的要点有哪些？

（二）思考题

1、请查阅资料，对维生素C注射液进行处方分析。

2、请查阅2010版《中国药典》，比较溶液型注射剂、悬型注射剂、乳剂型注射剂、注射用无菌粉末在质量评价方面的异同。

3、请查阅资料，了解安瓿在生产过程中以及质量评价方面的要点。分析实验过程中出现的熔封安瓿失败操作的原因。

（三）课外拓展实验

1、维生素C注射液澄明度检查（2010版药典二部）

取20支，取供试品擦尽外壁，置于遮光板边缘处，在明视距离（25cm）处，在黑色背景下，1000-1500lx光强度下，手持供试品，使安瓿颈部旋转和翻转使药液中的可见异物悬浮，用目检视。重复3次，总时限为20秒。每次可持2支。

注意事项

1、加速实验过程中要注意安全，防止水浴锅烧干及安剖瓶爆破伤人。 2、样品较多，注意编号不要错误。

3、实验中涉及的熔封和开瓶操作较危险，注意实验安全。