现代化学实验技术

实验1 从槐花米中提取芦丁

一、目的要求

（1）学习从天然产物中提取黄酮苷的原理和方法。 （2）学习重结晶提纯固体物质的原理和方法。 （3）掌握黄酮苷的纸色谱检验操作。

二、实验原理

芦丁又称芸香苷，广泛存在于植物中，其中槐花米中的含量达12%～16%。芦丁有调节毛细血管壁渗透性的作用，临床用作毛细血管止血药，也作为高血压症的辅助治疗药物。芦丁是糖苷类化合物，常含三分子结晶水，呈淡黄色针状结晶，熔点为174～178?C，无水物的熔点为188?C。芦丁在冷水中的溶解度为1:10000，沸水中为1:200；冷乙醇中为1:650，沸乙醇中为1:60；易溶于碱性水溶液，难溶于酸性水溶液，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等。

本实验是利用芦丁易溶于碱性水溶液、酸化后又析出的性质进行提取，并利用它在冷水中和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶提纯。芦丁是糖苷类化合物，其糖苷键在酸性条件下可水解产生对应的甙元——槲皮素，所以芦丁的分离鉴定可用纸色谱进行，常用乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3）或正丁醇:冰醋酸:水（4:1:5）作展开剂。

三、主要仪器和试剂

1. 主要试剂

槐花米、石灰乳、浓盐酸、pH试纸、质量分数95%乙醇、展开剂（乙酸乙酯:甲酸:水=6:1:3）、显色剂（质量分数2%三氯化铝）、饱和芦丁标准品乙醇溶液、饱和槲皮素标准品乙醇溶液。

2. 主要仪器

250mL烧杯、500mL烧杯、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、表面皿、毛细管、铅笔、直尺、色谱滤纸（中速、20cm×7cm）、色谱缸、烘箱、电炉、台平。

四、操作步骤

1. 芦丁的提取

取10g槐花米，置于250mL烧杯中，加入100mL水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH=8～9，在此pH下保持微沸20～30min，趁热抽滤，残渣再加50mL水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60～70?C下用浓HCl调至pH=4～5，使沉淀完全，抽滤，沉淀用少量蒸馏水洗涤，抽干，60?C干燥得粗芦丁。

2. 芦丁的精制

用水重结晶：将粗芦丁置500mL烧杯中，加入适量蒸馏水，加热煮沸，趁热抽滤。滤液静置，充分冷却，析出芦丁晶体，抽滤，产品用蒸馏水洗涤，70～80?C烘干，称重，得芦丁产品。

3. 芦丁的纸色谱检验

样品：饱和芦丁自制品乙醇溶液。

对照品：饱和芦丁标准品乙醇溶液和饱和槲皮素标准品乙醇溶液。 支持剂：色谱滤纸（中速，20cm×7cm）。 展开剂：乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3）。 显色剂：质量分数2%三氯化铝喷雾。

1

五、实验结果

1、粗芦丁为土黄色粉末，精制后的芦丁产品为淡黄色粉末。 2、产率：

3、芦丁纸色谱显色中：在色谱中，对照品饱和槲皮素标准品乙醇溶液有明显显色现象，饱和芦丁标准品乙醇溶液显色不明显；样品饱和芦丁自制品乙醇溶液有显色，但其显色最高点和槲皮素显色点高度不一致，最低点显色不明显。

m(槐花米)/g 10 m(芦丁)/g 0.3550 产率/% 3.5 六、分析与讨论

1、芦丁颜色正常，因为粗芦丁中海混有杂质，所以颜色较精制后芦丁深。

2、精制芦丁产率较低，可能是因为：乘热抽滤时溶液温度下降，芦丁析出留在滤纸上；还有部分芦丁未从槐花米中煮出；芦丁转移过程中损失等等。

3、实验所需槐花米粉碎太细，导致抽滤十分缓慢，因而本实验后来用纱布代替滤纸。 4、本来还应有一个粗产率，但因为实验考虑不周全，没有测定粗芦丁质量，所以芦丁粗产率无法计算得到。

5、纸色谱显色：饱和芦丁标准品乙醇溶液所有组都没有显色，可能是制备标准溶液时芦丁浓度太低；槲皮素显色正常，没有问题；样品饱和芦丁自制品乙醇溶液显色不明显，可能是精制芦丁混有杂质。

实验2 分光光度法测定蔬菜总铁量

一、目的要求

（1）学习邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法，掌握分光光度计的使用。 （2）掌握标准曲线的绘制方法。

（3）掌握样品的灰化方法及高温炉的使用。

二、实验原理

在紫外-可见区电磁辐射的作用下，多原子分子的价电子发生跃迁，从而产生分子的吸收光谱。各种物质的分子都有其特征的吸收光谱，以此来获得定性的信息。而在选定波长下测量吸光度A与物质浓度c的关系，可对物质进行定量测定。分光光度法测定的基本原理是依据朗伯-比尔定律，即

A??lgT?lgI0I?Kcl

式中T为透光率；I0为入射光强度；I为透射光强度；l为吸收池厚度；c为浓度；K为吸光系数。当入射光波长及吸收池厚度一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度

c成正比。

用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度由小到大的标准溶液，在指定条件下依次测量各标准溶液的吸光度，在一定浓度范围内，溶液的吸光度与其浓度呈直线关系。以溶液的浓度c为横坐标、相应的吸光度A为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。测定未知试样时，操作条件与标准曲线上的相同，根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度，就可计算出试样中被测物的含量。测定时通常以试剂空白溶液为参比溶液，调校仪器的吸光度零点，即100%

2

透光率。

邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量铁（Ⅱ）的灵敏度高的显色剂，在pH=2～9的溶液中，邻二氮菲与Fe2＋生成稳定的橙红色配合物。该配合物的lgK稳=21.3，在508nm处有最大吸收，摩尔吸光系数为1.1×104L?mol-1?cm-1。在pH=2～9之间，颜色深度与酸度无关，且在有还原剂存在的条件下，颜色深度可保持数月不变。当铁（Ⅱ）浓度在5.0mg?L以内时，吸光度与Fe浓度呈直线关系。Fe

＋

2＋

-1

2＋

3

与邻二氮菲能生成淡蓝色配合物，lgK稳=14.1，因此在Fe显色前应先用盐酸羟胺（或抗坏血酸、

3＋

2＋

对苯二酚等还原剂）将Fe还原为Fe，以测定总铁量。

三、主要仪器及试剂

1.主要试剂

（1）铁标准溶液：准确称取0.345g分析纯硫酸铁铵[NH4Fe(SO4)2?12H2O]置于烧标中，加入60mL6mol?L-1HCl和少量水，溶解后用蒸镏水定容至lL，其浓度为40.0?g?mL-1。

（2）盐酸羟胺（NH2OH?HCl）溶液：质量分数为10%，新鲜配制，两周内有效。

（3）邻二氮菲溶液：质量分数为0.20%，配制时先用少量乙醇溶解，再用水稀释（避光保存），两周内有效，若出现红色则不能使用。

（4）醋酸钠溶液（1.0mol?L-1），HCl溶液(0.1mol?L-1和6mol?L-1)。 2. 主要仪器

分光光度计、lcm比色皿、25mL比色管、10mL吸量管、5mL吸量管、2mL吸量管、lmL吸量管、l00mL容量瓶、蒸发皿、坩埚、电炉、高温炉、分析天平。

四、操作步骤

1. 蔬菜样品的灰化及灰分液的制备

将蔬菜样品切碎，称取20g置于蒸发皿中，在电炉上慢慢加热炭化至无烟，然后转入坩埚并置于高温炉中，在550?C下灰化至无炭粒。称取灰分0.1g（称准至0.001g）于小烧杯中，加入2mL6mol?L-1HCl，使灰分溶解，再加入6mL0.1mol?L-1HCl，搅匀，抽滤，再用适量0.1mol?L-1HCl洗涤烧杯和滤纸，合并滤液和洗涤液，最后用蒸馏水定容至100mL，所得灰分液浓度为0.001g?mL-1。

2. 标准曲线的绘制

用25mL比色管按下表顺序配制铁标准系列并记录测量数据（注意：加入盐酸羟胺后需摇匀，放置2分钟，再进行下一步操作），以空白液为参比，在508nm波长下测定各溶液的吸光度。在坐标纸上以铁的质量浓度（?g?mL-1）为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 编号 1 项目 铁标准溶液/mL 质量分数10%盐酸羟胺/mL 质量分数0.20%邻二氮菲/mL

1.0mol?L-1NaAc/mL

蒸馏水 吸光度A

2 1.00

3 1.50

4 2.00 0.50 1.00 2.00

5 2.50

空白 0.00

0.50

稀释至25mL

3

0