FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程

1. 目的

规范流式细胞仪FACSCalibur操作维护规程，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行和设备安全。 2. 适用范围

适用流式细胞仪FACSCalibur的使用操作。 3. 职责

3.1操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行正常维护，并作使用记录。

3.2保管人负责监督仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护和保养。

3.3仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。 4. 操作程序

4.1安全操作注意事项和特别提示：

4.1.1该仪器必须有专人保管，使用前需通读仪器说明书。 4.1.2严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上停止使用，并立即向保管人、仪器管理人以及科室负责人报告，严格按照单位有关制度实施，不得擅自“修理”，查明原因，处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。

4.2设备每日开机程序：

4.2.1开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。

4.2.2开启其它周边配备电源，如打印机，开启计算机。 4.2.3确认鞘液筒有八分满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的；所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。

4.2.4将气压阀方向调在加压位置，用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起。 4.2.5排除液流过滤器中的气泡。

4.2.6等待机器预热5---10分钟后可开始实验。 4.3 设备质控程序： 4.3.1试剂准备：

4.3.1.1 取试剂盒中的Unlabeled试剂，充分混匀，加一滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled。

4.3.1.2 取FITC、PE、PerCP、Unlabeled试剂 ，充分混匀，各加一滴到第二支装有3ml鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。

4.3.2 上机操作：

4.3.2.1 按电脑桌面的FacsComp进入质控程序。 4.3.2.2

在出现的“Sign in” 窗口中输入操作者姓名、单位、

领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单击“Accept”。

4.3.2.3 序。

4.3.2.4

在Calibrite Beads Lot IDs中,根据每种颜色的beads在试验选项中，选择 Lyse/No-Wash(LNW)：免洗程

所对应的Lot Ids，输入编号，此编号在Calibrite beads试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是Calibrite beads? 3 Batch NO, 选择FACS Flow Sheath下

的编号(右侧的编号)。APC Lot ID(此栏不能空，即使是三色校正试剂) 。

4.3.2.5

在右侧的保存选项中文件会自动保存,路径

Facstation\\BD file\\FACSComp\\DDMMYY,还可以单击“Location” 改变文件保存路径。

4.3.2.6

按Run开始上样，在仪器面板上按Run Hi。高速运行，

速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。

4.3.2.7

上第一管后，按Start键，仪器自动调节PMT,完成后

窗口底部出现“PMT set Successfully”,暂停5秒后自动进入下一个调节窗口。注意：速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。

4.3.2.8

上第二管，单击Start，仪器开始自动调节补偿并进行

灵敏度测试。

4.3.2.9

完成后仪器会给出提示，最后软件给出一个Summary

Report。检查报告中的“Result”是否都PASS，如果有的没有PASS，检测原因。①是否试剂过期，②两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同, ③仪器做月维护,完成后再重新做FACSComp仪器指控。

4.3.2.10 打印报告，退出FACScomp软件。 4.4 样本检测程序 4.4.1.

样本准备：

4.4.1.1 取TruCount Tube，编号。

4.4.1.2 用反向加样法在Tube中加入50ul充分混匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球（Beads）。