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文件編號：Lab.SOP-COA-0002 版 次：01 标准操作规程 —— 活化部分凝血活酶时间测定（APTT） 編修日期：05.09.15 頁 次：第 頁共 頁 编 写： 单位名称：

1.项目名称：

活化部分凝血活酶时间（Activated Partial Thromboplastin Time, APTT） 2.检验原理：

2.1.检测原理：全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测——血浆样本经过一定时间的温育后，加入

反应试 剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程（纤维蛋白原 转化为纤维蛋白）中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分比原理方法求得凝血 时间。

2.2. 反应方法学溯源：37℃条件下，以鞣花酸激活因子Ⅻ和Ⅺ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板， 在Ca2+参与下，观察贫血小板血浆凝固所需时间，即为活化部分凝血活酶时间，是内源凝血系统较敏感和 常用的筛选试验。

3.设备参数：

3.1.设备:仪器型号Sysmex CA1500全自动血凝分析仪

3.2.分析和计算参数：报告单位 秒(S)

3.3.样本量：50μl ,试剂量:50ul激活剂,50ul CaCl2

3.4.检验时间：在最长检验时间之内测出结果，标准设置最长检验时间：190秒 3.5.重复性：CV≤2%

4.试剂及配套品：

4.1.激活剂:Cephaloplastin试剂（Dade? Actin? Activated Cephaloplastin Reagent）

4.1.1.商标：西门子（SIEMENS） 4.1.2.包装规格： 10×2ml 4.1.3.货号：B4218-1 4.1.4.成分：脑磷脂（从干燥兔脑粉中提取）加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的 鞣花酸溶液 4.1.5.使用方法:液体试剂,直接使用. 4.1.6储存:没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期,开盖后2~8℃有效期7天

4.2. 氯化钙溶液（Calcium Chloride Solution）

4.2.1.商标：西门子（SIEMENS） 4.2.2.包装规格：10×15ml 4.2.3.货号：ORHO 37

4.2.4.成分：0.025mol/L的氯化钙溶液

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4.2.5.使用方法:液体试剂,直接使用. 4.2.6储存:没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期,开盖后2~8℃有效期7天

4.3． 清洗液（Clean I） :用于测定过程中的吸样针冲洗

4.3.1.商标：希森美康（Sysmex） 4.3.2.包装规格：50ml 4.3.3.货号：GSA500A

4.3.4.成分：1%次氯酸钠及活性成分 4.3.5.使用方法:液体试剂,直接使用. 4.3.6储存:没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期,开盖后放于仪器上有效期仅24小时

4.4.校准质控血浆（Ci-Trol?）

4.4.1.商标：西门子（SIEMENS）

4.4.2货号： Level 1 (Normal), 291070 10×1ml Level 2 (Abnormal),291071 10×1ml

Level 3 (Abnormal), 291072 10×1ml 4.4.3.使用方法:1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用 4.4.4储存: 室温: 2h, 2~8℃: 4h,冷冻分装保存：-20°C <2周,-70°C <6个月

5. 操作步骤：

5.1. 开机：开打印机电源→开CA1500仪器右侧电源→开机后机器进行自检、预热， 当屏幕

上显示“Ready”时可以进行试验 5.2.每日针冲洗：在主屏幕上选“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行针冲洗

5.3.准备试剂：按照仪器试剂位置设定，把上述每项的试剂准备好，放在相应的位置 5.4.准备反应杯：打开仪器顶部反应杯储存槽，查看反应杯是否够量，需及时添加

5.5.准备标本：将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上（一个架子可放10个样本），

准备好放在进样器上 5.6.输入试验项目：按下主菜单上的“Work List”键，在试验项目键点击APTT，使APTT项目下显

示“—”变为“○”，按“↑或↓”将需要测试标本如上操作选择； 5.7.输入样本号：按下“ID No.Entry”，按顺序输入样本的序号或病人的病历号 5.8.开始检测：待一切准备工作就绪，按下屏幕右上角“START”键，仪器开始检测…

5.9.查看结果：返回主屏幕，检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成，然后按下

“Stored Date”（储存结果）键，屏幕会换到结果显示界面，按下边第一个菜单“Graph”， 查看凝集曲线、吸光度、结果等，检查是否有Error错误信息，有错误报警的标本需考 虑重测 5.10.关机前冲洗针：关机前需要洗针，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute” 5.11.关机：回到主屏幕下，切断仪器电源，关闭打印机。

6. 参考范围：APTT (sec)：25~35s

7. 临床意义：常用来筛选内源性凝血系统（VIII、IX、XI、XII）及肝素抗凝治疗的监测

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7.1.APTT延长：见于先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子XII、XI缺乏，VWF等）；多种凝血子缺乏（如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等）；血液中有抗凝物存在 7.2.对内源凝血途径因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）缺乏较CT敏感（血小板异常不影响APTT）能检出Ⅷ：C小于25%的轻型血友病。对凝血酶原、纤维蛋白原缺乏则不够敏感，故APTT延长的最常见疾病为血友病。此时可进一步做纠正试验，即于患者血浆中加入1/4量的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆或正常血清（试剂参见凝血酶原消耗试验的纠正试验），再做APTT，如正常血浆和吸附血浆能纠正延长的结果而血清不能纠正，则为因子Ⅷ缺乏；如吸附血浆不能纠正，其余两者都能纠正，则为因子Ⅸ缺乏；如三者都不能纠正，则为病理性循环抗凝物质。

7.3. APTT缩短：见于DIC高凝期和妊娠高血压综合症等高凝状态

7.4. 是监测肝素治疗的首选指标::在使用肝素治疗时，多用APTT监测药物用量，一般以维持结果

为基础值的2倍左右

8.标本要求：

8.1.使用3.8%拘橼酸钠溶液作为抗凝剂；

8.2.血样与抗凝剂的比例为9:1，如果血球压积<20%或>55%，则需调整这个比例，方法是：0.00185×血液毫升数×(100-压积)=抗凝剂毫升数；

8.3.血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆）；

一采样后60分钟内进行；

一分离血浆应在3000r/min 离心10分钟，务使血小板去除； 8.4.血浆保存条件： 温度 室温 2—8℃ -20℃ -70℃ 有效时间 ≤2hr ≤4hr ≤2Weeks ≤6months 8.5.低温保存的样品，要在37℃迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。 8.6.所有与标本接触的试管、吸管等均采用用塑料或硅化处理的。

8.7. 拒收标本:严重溶血、黄疸、脂血或出现凝块,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的

9. 参考依据：《CA1500全自动血凝仪使用手册》，试剂使用说明书 10. 附件：

10.1 CA1500常规操作流程 10.2. APTT试剂使用说明书

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文件編號：Lab.SOP-COA-0003 版 次：01 单位名称： 标准操作规程 —— 凝血酶原时间测定（PT） 編修日期：05.09.15 頁 次：第 頁共 頁 编 写： 1.项目名称：血浆凝血酶原时间测定（prothrombin time ，PT）

2.检验原理：

2.1.检测原理：全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测原理——血浆样本经过一定时间的温育后，加

入反应试剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过 程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分 比原理方法求得凝血 时间。 2.2. 反应方法学溯源：

凝血酶原时间（PT）测定是Quick于1935年创立的。在受检血浆中加入过量的组织凝 血活酶（人 脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血 酶，后者使纤维蛋白 原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需要的时间即凝血酶原时间。 其凝固时间取决于凝血因子Ⅱ、 Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。该试验是反映外源凝血系统最 常用的筛选试验。

3.设备参数：

3.1.设备:仪器型号Sysmex CA1500全自动血凝分析仪

3.2.分析和计算参数：凝血酶原时间-秒(S), 国际标准化比值-INR, 凝血酶原活动度-%, 凝血酶原比值 -PTR

3.3.样本量：50μl ,试剂量:100ul0

3.4.检验时间：在最长检验时间之内测出结果，标准设置最长检验时间：120秒 3.5.重复性：CV≤2%

4.试剂及配套品：

4.1. 反应试剂:凝血活酶含钙试剂（Thromborel? S） 4.1.1商标：西门子（SIEMENS） 4.1.2包装规格： 10×10ml

4.1.3使用方法:每瓶用10ml蒸馏水溶解,须放置室温或37℃30分钟后才使用

保存:未溶解试剂2~8℃ 至包装有效期,试剂溶解后2~8℃ ：7天

4.1.4货号： OUHP49

4.1.5参数：ISI（国际敏感度指数）≈1.02

(每次更换试剂批号需将包装中所附ISI指数表中对应仪器型号的ISI值输入仪器中.(输入方法:主菜单→STANDARD CURVE→SELECT TEST→PT→MANUAL ENTRY→光标在ISI处输入ISI值

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4.1.5.成分：Thromborel? S Reagent中包含 :

a. 冻干人胎盘促凝血酶原激酶（lyophilized human placental thromboplastin） b. 氯化钙 (calcium chloride) c. 稳定剂 (stabilizers) d.防腐剂（Preservatives）

4.2． 清洗液（Clean I） :用于测定过程中的吸样针冲洗 4.2.1.商标：希森美康（Sysmex）

4.2.2.包装规格：50ml 4.2.3.货号：GSA500A 4.2.4.成分：1%次氯酸钠及活性成分 4.2.5.使用方法:液体试剂,直接使用.

4.2.6储存:没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期, 开盖后放于仪器上有效期仅24小时

4.3 标准血浆: （Standard Human Plasma）-用于PT%的定标校准

4.3.1商标：西门子（SIEMENS） 4.3.2货号： ORKL 13 4.3.3包装:6X1ml 4.3.4.使用方法:1ml蒸馏水溶解,放置15分钟后使用 4.3.5储存:没开配试剂放2~8℃存放至包装有效期, 开配后保存条件: 室温: 2h, 2~8℃: 4h, -20°C分装冷冻保存：<2周, -70°C分装冷冻保存：<6个月

4.4.质控血浆（Ci-Trol?）

4.4.1.商标：西门子（SIEMENS）

4.4.2货号： Level 1 (Normal), 291070 10×1ml Level 2 (Abnormal),291071 10×1ml Level 3 (Abnormal), 291072 10×1ml

4.4.3.使用方法:1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用

4.4.4储存: 没开配试剂放2~8℃存放至包装有效期, 开配后保存条件: 室温: 2h, 2~8℃:

4h,冷冻分装保存：-20°C <2周,-70°C <6个月

5. 操作步骤：

5.1. 开机：开打印机电源→开CA1500仪器右侧电源→开机后机器进行自检、预热， 当屏幕上显示“Ready”时可以进行试验 5.2.每日针冲洗：在主屏幕上选“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行针冲洗

5.3.准备试剂：按照仪器试剂位置设定，把上述每项的试剂准备好，放在相应的位置 5.4.准备反应杯：打开仪器顶部反应杯储存槽，查看反应杯是否够量，需及时添加

5.5.准备标本：将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上（一个架子可放10 个样本），

准备好放在进样器上 5.6.输入试验项目：按下主菜单上的“Work List”键，在试验项目键点击PT，使PT项目下显示“—”

变为“○”，按“↑或↓”将需要测试标本如上操作选择； 5.7.输入样本号：按下“ID No.Entry”，按顺序输入样本的序号或病人的病历号 5.8.开始检测：待一切准备工作就绪，按下屏幕右上角“START”键，仪器开始检测…

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