脓汁和粪便标本中病原菌的检测

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一 实验目的：从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理，树立牢固的无菌观念。

二 实验器材：试管架,酒精灯,污物盘，普通冰箱，隔水式电热恒温培养箱，奥林巴斯 CX21型 生物显微镜，乙醇乙醚，吸水纸，石蜡油，拭镜纸，染色架，革兰染色瓶，1500W电炉，石棉网，手套，酒精棉球，镊子，碘酒棉球,接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、冷藏室、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子

三 方法与步骤：

1培养基的制备、消毒和灭菌: ○

1. 调配→溶化→ 矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。

2. 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定→保存。

②细菌的分离培养: 采用平板划线分离法，将取脓汁和粪便标本中混杂的多种细菌，分别在普通平板和伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h ，从而分离出单个菌落。

③细菌的纯培养：脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落；粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。挑选这四种不同菌落分别在斜面培养基上接种

④细菌的形态学检查：涂片制备 → 干燥 → 固定→ 革兰染色

⑤细菌的生化试验等 : 糖发酵试验, 细菌药物敏感性试验, 血浆凝固酶试验, 半固体接种法, 痢疾血清玻片凝集反应 ⑥结果观察、分析、总结

四 结果与讨论

脓汁和粪便标本细菌检测结果 标本 菌落 形态 血浆 凝固酶 葡 乳 半 福痢血清 青 链 庆 结论 金黄色 葡萄球菌 白色 葡萄球菌 大肠 埃希菌 福氏 志贺菌 黄色 脓汁 白色 G+球 + + + + G+球 - + + + 紫黑 粪便 粉红

G－杆 ⊕ ⊕ + - + + G－杆 + - - + - + +

结果讨论：

1. 在制备好培养基后，我们首先采用的是平板划线分离法，从脓汁标本中分离出黄

色和白色两种菌落→在显微镜下观察，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌→再结合菌落或菌苔颜色，可初步断定，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌→再通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。

2. 用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明菌

落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和福氏志贺菌。

在实验过程中，出现以下情况：

1. 开始做实验的时候，可能是第一次做微生物实验，很多操作都不规范。例如，没有在无

菌操作区进行操作；没有坐着操作；操作时经常会和旁边同学交流；棉塞下端接触到管口外的地方；试管用完后忘记将管口迅速通过火焰3次等等。这些错误的操作的发生，都因为没有养成无菌操作的习惯，应加以改进。

2. 在培养基上接种培养细菌后，出现有的培养基显示的细菌数量聚集在一起，没有形成单

菌落，这是因为，划线的时候力度不对，把琼脂给划破了，标本都渗进了琼脂里面，再用接种环划线时也不能将细菌分离。

3. 在进行糖发酵试验时，结果显示该有气体产生的却没有气体产生。这可能是因为我们试

验完成后，管口朝上，反应过程中产生的气体溢出，观察不到正确的实验结果。

综上所述，对病原菌的正确检测对指导临床用药具有重要意义，只有在正确知道细菌种类的情况下才能对菌用药，否则就会容易造成耐药性的产生，不容易治愈疾病。在试验过程中必须严格按照试验的要求去做，操作者应树立一种无菌概念，尽量在无菌环境下操作，既能确保能够得出正确的实验结果，又保证操作者的安全和环境不受污染。