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酶切完成后进行胶回收

2. 载体用pCDNA3.1双酶切，酶切体系如下。 20ul酶切体系 37度3小时 4ul pCDNA3.1载体（500 ng/ul） 1ul BamHI 1ul EcoRI 2ul 10×buffer 12 ul H2O

酶切完成后胶回收（见附录）

处理好的目的片段与载体连接反应体系： 6ul PCR 酶切回收片段（约50ng/ul） 1ul 酶切好的载体（约50ng/ul） 2ul ligase buffer 1ul T4ligase 10ul H2O

以上连接液在16℃过夜。

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转化 (感受态细胞: DH5a),具体步骤见附录转化部分。 抗性: Amp; 37℃，培养过夜

转化后X基因分别平板挑菌, 37℃ 250转/分钟摇菌14小时，PCR鉴定后，将阳性菌液送上海权阳生物技术有限公司测序。

X基因慢病毒载体单克隆菌落PCR鉴定（使用载体通用引物,PCR条带大小应比实际大200bp左右）：

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