选择步骤：①广泛查阅文献；②选定侯选方法；③侯选方法的初步试验。 3.简述方法比较试验中比较方法的选择。

答：在进行临床化学常规方法的评价时，最好选择参考方法作为比较方法，这样在解释结 果时，可把方法间的任何分析误差都归于侯选方法。 六、计算

1.有下列四个样品：

（1）基础样品： 血清2ml + 0.1ml生理盐水

（2）回收样品Ⅰ：血清2ml + 0.1ml 20mmol/L葡萄糖标准液 （3）回收样品Ⅱ：血清2ml + 0.1ml 60mmol/L葡萄糖标准液 （4）回收样品Ⅲ：血清2ml + 0.1ml 100mmol/L葡萄糖标准液

用GOD-POD法测得上述四个样品的浓度分别为5.88mmol/L、6.80mmol/L、8.90mmol/L和10.70mmol/L。试计算回收样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的加入浓度、回收浓度、回收率以及平均回收率。 解：根据回收浓度=分析标本测定浓度－基础样本测定浓度，

加入浓度=（标准液量×标准液浓度）/（病人样品量+标准液量）， 回收率（%）=回收浓度×100/加入浓度， ①加入浓度Ⅰ=(0.1*20)/(2+0.1)＝0.95mmol/L 回收浓度Ⅰ=6.80－5.88＝0.92mmol/L 回收率Ⅰ=0.92/0.95＝96.8%

②加入浓度Ⅱ=(0.1*60)/(2+0.1)＝2.86mmol/L 回收浓度Ⅱ=8.90－5.88＝3.02mmol/L 回收率Ⅱ=3.02/2.86＝105.6%

③加入浓度Ⅲ=(0.1*100)/(2+0.1)＝4.76mmol/L 回收浓度Ⅲ=10.70－5.88＝4.82mmol/L 回收率Ⅲ=4.82/4.76＝101.3%

平均回收率=（回收率Ⅰ+回收率Ⅱ+回收率Ⅲ）/3=101.2% 2.有下列三个样品：

（1）基础样品： 血清0.9ml + 0.1ml生理盐水 （2）干扰样品Ⅰ：血清0.9ml + 0.1ml 4mmol/L尿酸 （3）干扰样品Ⅱ：血清0.9ml + 0.1ml 8mmol/L尿酸

用GOD-POD法测定的上述三个样品的葡萄糖浓度分别为：6.50mmol/L、6.20mmol/L、5.95mmol/L。试计算干扰样品Ⅰ、Ⅱ的加入尿酸值和干扰值以及平均每1mmol/L的尿酸会产生多少mmol/L葡萄糖的干扰值。

解：干扰值=干扰样本测得值—基础样本测得值

则干扰值Ⅰ=6.20－6.50＝－0.3 mmol/L 干扰值Ⅱ=5.95－6.50＝－0.55 mmol/L；

加入尿酸值Ⅰ=0.1×4＝0.40mmol/L 加入尿酸值Ⅱ=0.1×0.8＝0.80mmol/L

平均每1mmol/L的尿酸会对此葡萄糖溶液产生的干扰值为[（－0.3/0.4）+（－0.55/0.8）]/2=－0.72mmol/L。

第六章 酶学分析技术

一、名词解释

1.细胞内酶：指存在于各种组织细胞内进行代谢的酶类。这些酶极少进入血液，由此细胞内外浓度差异悬殊。

2.酶活性：即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量 3.酶活性单位：指在一定条件下使酶促反应达到某一速度时所需要的酶量。

4.酶活性国际单位：1IU指在规定条件下（25℃，最适pH，最适底物浓度），每分钟催化1mmol底物发生反应的酶量。

5.延滞期：反应开始时，酶与底物分子结合很少，反应速度很慢，底物或产物的变化量与时间不成正比，这一时期称为延滞期。

6.线性期：延滞期的时间一般为数秒钟到数分钟；随着时间的推移，酶与底物分子结合增多，反应速度加快，底物或产物的变化量与时间成正比，这一时期称为线性期。

7.偏离线性期：在酶促反应过程中，随着底物的减少和产物的增加，逆反应增强，反应速度减慢，这一时期称为偏离线性期。

8.定时法：是指酶促反应一段时间后。加入强酸、强碱终止反应，测定这段时间内底物的减少量或产物的增加量，计算酶促反应的平均速度。

9.连续监测法：是测定底物或产物随时间的变化量，又称为速率法。该方法每隔一定时间（10～60s）测定一次底物或产物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对时间作图，绘制反应速度曲线。

10.工具酶：在酶学分析中，往往利用酶作为工具，检测另一种酶的活性或底物浓度，我们将作为试剂用于测定待测酶活性或底物浓度的酶称为工具酶。

11.血浆特异性酶：属于血浆蛋白的固有成分，在血浆中发挥特定催化作用的酶，如凝血酶类、纤溶酶类等。

12.Trinder反应：指H2O2与某些色原物资在过氧化物酶（POD）的催化下生成有色物质的反应。该反应是酶学分析方法中应用最多的指示反应之一。由Trinder在1969年提出故称为Trinder反应。 二、填空

1.酶活性指在规定条件下单位时间内(底物的减少量)或(产物的增加量)。酶活性单位是指一定条件下使酶促反应达到某一速度时所需要的(酶量)。 2.1IU指在(规定条件下，每分钟转化1μmol底物的酶量)。

3.1Katal=(60×10 )IU，1IU= (16.67) nKatal。

4.酶促反应时间进程曲线分为三个阶段，分别为(延滞期)，(线性期) ，(偏离线性期)。 5.米-曼氏方程为V=(Vmax×[S])/(Km+[S])。当v=75%Vmax时，Km= 〔S〕。 6.最常用的求Km和Vmax值的作图法：(双倒数作图法)。 7.酶活性的测定方法分为(固定时间法)和(连续监测法)。 8.定时法和连续监测法又分别称为(终点法)与(速率法)。

9.在酶偶联法中，与待测酶相对应的常用的工具酶有(辅助酶)和(指示酶)。在酶学的EC分类中，常用的酶类属于(氧化还原酶类)、(转移酶类) 和(水解酶类)。 10. (前列腺)是血浆ACP的主要来源。

11.乳酸脱氢酶通过电泳法分离，在电泳结束时形成由正极向负极依次为 ( LD1)、(LD2)、(LD3)、(LD4)、(LD5)五条同工酶区带。

12.按照血浆酶的来源以及在血浆中的功能不同，可以将血浆酶分为(血浆特异酶)、(外分泌酶)、(细胞内酶)。

13.诊断肝脏功能最常用的酶是（ALT）和（AST）两种；MAO常用于（肝纤维化）的诊断。 14.常用于急性心肌梗死诊断的酶类有（AST）、（LDH）和（CK），三者统称为（心肌酶）。 15.用于诊断急性胰腺炎的酶有（淀粉酶）和（脂肪酶）。 三、单项选择

1.根据1976年国际生化学会委员会的规定，酶的一个国际单位是指(D) A、 最适条件下，每小时催化生成1mmol产物的酶量 B、37℃下，每秒钟催化生化1mol产生的酶量

C、25℃,其他为最适条件,每分钟催化生成1μMOL产物的酶量 D、在特定条件下,每分钟催化一个微摩尔底物产生变化所需要的酶量 2.下列哪一阶段的反应速度能代表酶的活性（D）

A、一级反应 B、二级反应 C、混合级反应 D、零级反应 3.关于Km值的描述,不正确的是（B）

A、Km值是酶的特征常数 B、Km值越大，酶与底物的亲和力越大 C、Km值取决于酶的种类和底物的性质 D、Km值越大，酶与底物的亲和力越小 4.下列叙述中哪一项是错误的(B)

A、LDH属于氧化还原酶 B、溶血可使血清LDH活性下降 C、LDH同功酶有五种 D、LDH的亚基有M和H两种

5.以磷酸对硝基苯胺为底物，速率法测定血清碱性磷酸酶， 其监测波长为(C) A、340nm B、380nm C、405nm D、500nm 6.还原型辅酶Ⅰ（NADH）的最大吸收峰是（D） A、220nm B、280nm C、260nm D、340nm

6

7.采用卡门氏单位测定丙氨酸氨基转移酶的方法是(D)

A、改良穆氏法 B、金氏法 C、酶联-紫外连续监测法 D、赖氏法 8.水解酶是一组催化水解反应的酶，属于水解酶的是(A)

A、碱性磷酸酶 B、葡萄糖氧化酶 C、丙氨酸氨基转移酶 D、肌酸激酶 9.下列酶与底物组合中哪项错(C)

A、胆碱酯酶---乙酰胆碱 B、碱性磷酸酶---磷酸苯二钠 C、乳酸脱氢酶---丙氨酸 D、淀粉酶---淀粉 四、判断（正确的在括号内打“√”，错误的打“×”） 1.在过量底物存在下，酶的活力越高，线性反应期越长。（×）

2.酶偶联法测定转氨酶，以340nm处吸光度的下降速率计算出酶的活性单位。（√） 3.酶的反应速度随着温度上升而增加。（×） 4.只有一级反应的反应速度才能代表酶的活性。（×） 五、简答

1.简述Km值的应用。 答：a)鉴定酶的种类； b)反映酶与底物的亲和力；

c)选择酶的最适底物；

d)计算不同底物浓度是酶促反应速度相当于最大反应速率的比率； e)设计适宜的底物浓度 六、计算

1.连续监测法测LD酶活性。取血清50ul，加LD-P法试剂1.0ml，混匀，置37℃中。第120s时在波长340nm处1cm光径测得吸光度为1.45，第150s时测得吸光度为1.40。已知NADH毫摩尔吸光系数为6.3L·cm·mmol， 吸光度测定过程处于线性期。求血清中LD含量，并判断该结果是否在正常参考范围。

解：根据酶活性U/L=ΔA/min×10×VT/（mε×l×V）有：

（VT：反应液总体积，V：血清体积，l：比色皿光径，mε：6.3L·cm·mmol） LD（U/L）=

×10×1.05/（6.3×1×0.05）=333U/L

3

－1

－1

3

－1

－1

2.连续监测法测定血清碱性磷酸酶ALP活性。按表2操作：

表2 碱性磷酸酶ALP的测定

加入物（ml）

血清 D.W. 4NPP试剂

空白管(B)

/ 0.02 1.0

测定管(T) 0.02 / 1.0

混匀，室温405nm处，立即用0.5cm的比色皿分别在第1、