竭诚为您提供优质文档/双击可除

免疫印迹实验报告

篇一：免疫印迹实验报告——westerblot westernblot实验报告

摘要：目的：学习并掌握westernblot分离蛋白及观察方法

方法：westernblot 结果：见后文

结论：westernblot能很好地分离蛋白 关键词：westernblot、分离、小鼠组织、蛋白westernblottestreport

Abstract:objective:Learnandmasterthewesternblotproteinisolatedandobservationmethodmethods:westernblot：,sds-pageandelectrictransfer Results:seebelow

Keywords:westernblot、separate、mousetissues、protein

第 1 页 共 19 页

前言:免疫印迹又称western印迹(westernblotting)，与DnA的southern印迹技术相对应，两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为nc膜)，然后用探针检测特异性组分。不同的是，westernblotting所检测的是抗原类蛋白质成分，所用的探针是抗体，它与附着于固相载体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。该技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异敏感等诸多优点，具有从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测，以及从多克隆抗体中检测出单克隆抗体的优越性。该技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而无需对靶蛋白进行放射性标记。目前，westernblotting广泛用于蛋白质研究、基础研究和临床医学的研究。

免疫印迹可分成两个步骤：蛋白质由凝胶转移至固相基质；特异性抗体检测。蛋白质转移通常由电泳实现，现常用的方法有二：1半干法：将凝胶和固相基质似三明治样夹在缓冲液湿润的滤纸中间，通电10-30分钟可完成转移；2湿法：将凝胶和固相基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电45分钟或过夜课完成转移。本试验采用湿法转移。免疫印迹用膜通常有硝酸纤维素膜和尼龙膜两种。大多数应用前者。本实验也用硝酸纤维素膜进行转移。 1试剂与仪器

1.1试剂（所有试剂均供两组用）

第 2 页 共 19 页

1.1.18%电泳分离胶的配制 h2o6.9ml

30%丙烯酰胺4.0ml 1.5mol/LTris3.8ml 10%sDs0.15ml

10%过硫酸胺溶液0.15ml TemeD0.015ml 1.1.25%浓缩胶配制 h2o5.5ml

30%丙烯酰胺1.3ml 1.0mol/LTris1.0ml 10%sDs0.08ml

10%过硫酸胺溶液1.08ml TemeD0.015ml

1.2仪器夹心式电泳槽，电泳仪，硝酸纤维素膜，直径9cm培养皿，剪刀，镊子，刀片，微量移液枪，普通滤纸 2试验步骤 2.1蛋白质的提取

2.1.1取小鼠组织0.2g，用生理盐水洗去表面毛发等杂物，剪碎，加入生理盐水2ml； 2.1.2移入匀浆器，匀碎

2.1.3用移液枪移取1ml匀浆液入1号ep管中；

第 3 页 共 19 页