繁殖斑马鱼后代流程

1. 配鱼：头一天晚上将鱼配上，每个配种盒里放1条雄鱼，1～2条雌鱼。同品系的鱼自交至

少需要配10对，这样保证至少有5对产卵，以保证后代的基因库。不同品系的鱼（比如与野生型交配）配5对以上，保证至少有3对产卵。 2. 收集胚胎：当天早上收集胚胎，挑去其中异物，再用embryomedia 清洗2-3次，放入培养

箱。 3. 挑选胚胎：胚胎发育4-5小时，移去未受精的卵及死胚。第二天早上观察，若胚胎发育异

常（不是突变体）比率较高（>10%），则丢弃整盘胚胎。正常的胚胎中每盘取10～20枚左右，混成一盘，再分装成若干盘，每盘20～25枚（这样以后每缸鱼里面都有不同亲本的后代，以保证基因库的大小）。以后的四天内每日检查胚胎一次，去掉死胚。 4. 培养鱼苗：第5天的小鱼放入鱼房烧杯中，加入约200ml 鱼缸水（system water）, 放在标记为（5～12天）架子上。鱼苗进食有3个阶段：第一阶段草履虫，第二阶段丰年虫+草履虫，第三阶段丰年虫，每一阶段都放在不同的架层上。放进去后头两天观察一下鱼是否正常进食（可从鱼的肚子来观察），并且注意食物是否过多过少。在完全换成丰年虫之前要确认小鱼是否已经能吞食丰年虫（肚子是否变红），确认大部分都能吞食丰年虫之后再放到相应的架层上，否则应相应地增加或缩减第二阶段。经常检查（尤其是刚开始喂食阶段和不同阶段转换的时候一定要检查），用吸管吸除垃圾及死鱼。 5. 转入系统：满20天并且绝大多数小鱼能够吃丰年虫3～5天之后，将小鱼转到鱼缸中。鱼缸上贴上标签，并贴红标签（红标签是提醒阿姨少喂食）。用深蓝色细网孔后背板，确认后背板与鱼缸之间紧密接触，小鱼不会轻易跑到后背板后面。转入系统头两天关闭水流，2～3天之后水流成连续滴状为宜，以防小鱼被冲走。一周之后（此时鱼一个月大），水流进一步增加，但仍要比较小，水流基本垂直落下为宜。去红标签。 6. 分缸：当鱼满1.5个月，视其生长情况可以分缸，分成每缸10条鱼为宜。更换后背板和鱼

缸，使用浅蓝色大网孔后背板。水流调整到与成鱼一样。 7. 鉴定：当鱼2.5～3个月时，视其生长情况，鉴定突变体。更换鱼缸及后背板，使用成鱼鱼

缸后背板。 8. 交配：当鱼长到4个月大时，基本可以用于交配，但如果鱼比较小（正常成鱼应该3～4cm

左右，请参照1年左右的成鱼），说明鱼可能因为营养不良等原因成长较慢，宜再养大一些交配。一代鱼长成至少需要4个月的时间，所以大家涉及到用鱼的实验，应尽早安排。 9. 传代：当鱼满8～10个月时，需要进行传代。传代之前，请咨询一下鱼房管理员蒋逊，大家应尽量把传代时间错开，以免草履虫不够用。 注：养小鱼之前要确定总共要养的小鱼数目，总的原则是要保证有足够的后代（保种的话20条鱼左右就够了），但又不能浪费资源（比如需要20条鱼，结果养了80条）。正常情况下突变体需要养60条左右，这样最后得到48（按80%成活率）条成鱼，其中24～32条是突变体。其他不需要鉴定的鱼（转基因鱼）养30条左右。这样就能保证传代。但如果需要大量用某个品系的鱼，则要计算好需要的起始数量。