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脐带间充质干细胞原代分离

Protocol 1. 获得脐带组织

2. 将脐带组织用含有双倍双抗的PBS漂洗，把血块洗净。 3. 将脐带组织剪成3-5cm小段。

4. 横向夹住脐带组织，明显可见2条脐动脉和1条脐静脉。 5. 纵向剖开脐带，露出血管，将血管从周围组织分离出来。 6. 将脐带组织漂洗干净，用眼科剪将组织剪碎。

7. 加1mg/ml的胶原酶I，没过组织块即可，37℃摇床消化1h小时左右，看见基本没大

的组织块。

8. 加成纤维细胞培养液终止，并加入DNAase，过40um细胞筛。 9. 离心，1500rpm，15min

10. 弃上清，根据获得的细胞量接种细胞即可，一般一根脐带可接种1个10cm皿。 11. 4天左右可以传代。 12. 注意事项

1、 注意原材料的新鲜与保鲜。一般取来的材料都是当天来做，而且取材时最好是放在

含有双抗的PBS里，用冰盒运输。

2、取材时要保持严格的无菌操作

3、将组织漂洗干净，不要残留血块和毛发。 4、取材时要选用锋利的手术器械，防止损伤组织。 5、消化时间要掌握好，控制在大的组织块刚刚完全消化完。 6、要标记好细胞的品系，周龄，雌雄等信息。

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7、注意要用胶原酶I，而且消化时要加入DNA酶，防止粘稠。

实验所需试剂 产品名称 货号 公司 北京思赛因生物科技有限公司 北京思赛因生物科技有限公司 北京思赛因生物科技有限公司 北京思赛因生物科技有限公司 北京思赛因生物科技有限公司 北京思赛因生物科技有限公司 北京思赛因生物科技有限公司 北京思赛因生物科技有限公司 脂肪间充质干细胞完全培养基 HUMS-001-100 胶原酶I PBS 双抗 成纤维细胞培养液 DNA酶 0.25%胰酶 成纤维细胞冻存液 EC-002-50 BM-001-500 BS-003-100 FIBM-001-200 EC-003-01 ET-002-100 MEFiM-001-50