全国艾滋病检测技术规范
5新发感染检测方法 5.1 方法学原理
用于新发感染检测的方法包括HIV-1限制性抗原亲和力酶联免疫方法（HIV-1 LAg–Avidityenzyme immunoassay， LAg-Avidity EIA）和BED HIV-1
捕获酶联免疫方法（BED capture enzyme
immunoassay,BED-CEIA）。LAg–Avidity EIA方法的原理是，人体在感染HIV后产生的HIV-1特异性抗体对相应抗原的识别和结合能力随着感染时间的延长而增加，即亲和力逐渐增加。而BED-CEIA方法的原理是，HIV特异性IgG占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而逐渐增高。
两种方法均只适用于HIV-1抗体阳性样品。只应用于监测目的，不能用于个体诊断和临床，其用于监测及发病率计算的条件参见“《艾滋病病毒新发感染监测操作手册》 ”。目前对两种方法的评价结果显示，LAg–Avidity EIA方法的假阳性率较BED-CEIA方法低，受疾病状态，如CD4细胞计数，抗病毒治疗等因素的影响较BED方法小，可以更加准确地区分新近感染和长期感染者。因此，BED-CEIA方法正逐渐被LAg–Avidity EIA方法所替代。此外，也有快速新发感染检测方法的研究报道，因其具有快速、简便、价格低廉等优点，未来对其需求将会越来越多。 5.2 方法
5.2.1样品和信息：来源于哨点监测和病例报告系统，用于检测的为抗体阳性样本。
5.2.2实验室检测：首选推荐LAg–Avidity EIA，也可使用BED-CEIA。 5.2.3数据分析：根据哨点监测各人群新发感染检测结果，结合流行病学相关资料，计算重点人群HIV-1新发感染率,并进行适当校正；根据病例
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报告系统新报告感染者新发感染检测结果，计算新发感染者占新报告感染者的比例，并根据相关背景信息，综合分析新发感染情况。 5.3 样品的入选标准和排除标准 5.3.1入选标准
（1）新发感染检测必须应用诊断为HIV-1抗体阳性的血清或血浆样品，禁止将HIV-1抗体阴性样品纳入新发感染检测。
(2 ) 每份样品量不少于1mL。样品要求清亮、无严重溶血、没有交叉污染，必须保存在-20℃以下，反复冻融次数不多于三次。 5.3.2 排除标准
5.3.2.1 LAg–Avidity EIA方法
(1)如果同一人在六个月以内出现两份或两份以上确认阳性样品，将第一份样品纳入新发感染检测。
(2)所有艾滋病病人的样品。
(3)所有接受抗病毒治疗的感染者样品。 5.3.2.2 BED-CEIA方法
(1)如果同一人在六个月以内出现两份或两份以上确认阳性样品，将第一份样品纳入新发感染检测。
(2)所有艾滋病病人的样品。
(3)所有接受抗病毒治疗的感染者样品。 (4)CD4细胞<200个/uL者的样本。 5.3.3 相关要求
(1) 对于哨点样品，进行新发感染检测的样品量必须占应检测阳性样品的85%以上，否则不纳入新发感染检测。
(2)哨点样品必须具有哨点问卷编号，并尽可能补充病例报告系统卡片ID号。病例报告样品应当填写病例报告系统卡片ID号。
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5.4 结果处理和解释
5.4.1 LAg–Avidity EIA方法：
5.4.1.1 确定对照和校准品的中值OD值（中值OD值为3次OD值排序后中间的值，阴性对照的中值为两孔OD值的平均值），对照和校准品的中值OD值必须在下表范围内，两个NC样品的OD值都必须在该范围内，该试验才有效。否则，任何一个对照和校准品的中值OD值不在表2范围内，判定为无效，需要重新稀释样品进行检测。 5.4.1.2 计算标准OD值（ODn）
对照的ODn值＝对照的中值OD值/校准品的中值OD值
初筛试验：各样品的ODn值＝各样品的OD值/校准品的中值OD值 确认试验：各样品的ODn值＝各样品的中值OD值/校准品的中值OD值任一对照和校准品的ODn值必须在下表显示值的范围内，该试验才有效。否则，如果任何一个对照的ODn值不在表3范围内，该试验判定为无效，需要重新稀释样本并进行检测。 5.4.1.3 结果的解释
初筛试验：样本进行单孔检测，当ODn值>2.0时，该样本被判为长期感染样本，不需要进行确认试验。当样本的ODn值≤2.0时，该样本需纳入确证试验。
确认试验：初筛试验中ODn值≤2.0的样本稀释三份并三孔重复检测。当ODn值≤1.5，该样本判为近期感染，当ODn值>1.5时，该样本判为长期感染样本。 5.4.2 BED-CEIA方法
5.4.2.1 确定对照和校准品的中值OD（中值OD为3次OD值排序后中间的值），对照和校准品的中值OD值必须在表4范围内，该试验才有效。
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两个NC样品的OD值在初筛和确认中都必须在该范围内。 5.4.2.2 计算标准OD值（ODn）
对照的ODn值＝对照的中值OD/校准品的中值OD
初筛试验：各样品的ODn值＝各样品的OD值/校准品的中值OD 确认试验：各样品的ODn值＝各样品的中值OD值/校准品的中值OD 对照和校准品ODn值的正常范围：对照和校准品的ODn值必须在要求的范围内，该试验才有效。 5.4.2.3 结果解释
在中国的研究显示，BED的ODn为0.8时，可以指明平均血清阳转时间为168天。ODn为0.8时可以减少AIDS病人错分为近期感染的几率，进而得到较好的近期感染的预测值。
在初筛试验中样本为单份检测，当ODn值≤1.2时，样本需分成三份重复检测。在确认试验中，若ODn值≤0.8时，该份样品判为近期感染。 5.5 数据分析
5.5.1 LAg–Avidity EIA HIV-1新发感染率的计算
监测哨点HIV-1新发感染率是指：各省哨点监测重点人群中，每年新感染HIV-1人群占暴露人群的比例。原则上以省为单位计算各重点人群新发感染率。当样品数量足够大时，可以考虑按照地区计算新发感染率，也可以按照设定的因素（如年龄、性别、感染途径、婚姻状况、行为因素、受教育程度、地区等）对HIV-1新发感染率监测数据进行分层分析将新发感染检测数据汇总后（参考附件4格式），即可进行类似分析。
新发感染率计算公式：
（1） 美国CDC和UNAIDS/WHO推荐用于横断面研究计算公式：
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I?R?FRR*P?100%
(1?FRR)*(w/365)*N（2） Hargrove校正法： 中点公式：I?回顾公式：I?R?FRR*P?100%
(R/2)?N(w/365)?FRR*(N?P/2)R?FRR*P?100%
R?N(w/365)?FRR*T变量符号：①待计算的变量值：I＝新发感染率（高危人群中每100人年新感染的数量）；②在横断面调查中测量的变量值：T＝调查的总人数，P＝HIV-1 检测为阳性的总人数，N＝HIV-1检测为阴性的总人数，R＝实验判定为新近感染的总人数；③从单独的校准研究中获得的变量值：w＝窗口期（从血清阳转到实验方法能够判为新发感染的最长时间），FRR=错分率。
ODn等于1.5为界值判定新发感染计算LAg方法的窗口期为130天。感染时间超过一年且未接受ART治疗HIV感染者获得的FRR为2.30%。 5.5.2 BED HIV-1新发感染率的计算
监测哨点各类人群HIV-1新发感染率。同亲和力方法。新发感染率有McDougal和Hargrove两种计算法（在中国推荐优先使用McDougal计算法），每种方法均有中点公式和回顾公式。回顾公式是对在横断面抽样前一年的新发感染率估计，中点公式是对在横断面抽样约+/- 6个月时的新发感染率估计。
（1）McDougal法（调整灵敏度/特异度）
中点公式：I?回顾公式：I?F?(365/w)?R?100%
N?F?(365/w)?R/2F?(365/w)?R?100%
N?F?(365/w)?R(R/P)???1?100%
(R/P)?(????2??1)校正因子F：F?29