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60 % ，认为样品中的p24 抗原是真阳性；如果中和率小于60%，认为p24抗原的反应性可能是假阳性，需要做RNA检测或随访做进一步确证。
（3）电化学发光法(ECLIA)：原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验（ELISA法）。结果判断方法为，比较中和与未中和样本的COI值，根据说明书提供的方法计算中和率，如果中和率大于50 %，认为样品中的p24 抗原是真阳性；如果中和率小于50%，认为p24抗原的反应性可能是假阳性，需要做RNA检测或随访做进一步确证。 HIV-1RNA检测按照相关章节执行。 5.4 定量检测
将 p24抗原的标准物质稀释成包含0.0和125pg/ml 两个浓度在内的六个不同浓度的系列标准，进行检测。横坐标为p24抗原的浓度（pg/ml），纵坐标为OD值（酶联荧光分析法为RFV值、电化学发光法为COI值），绘制出标准曲线。测出未知样品的反应值（OD值、或RFV值、或COI值）以后，可在标准曲线上查出抗原的浓度。如果未知样品的反应值超出标准曲线上最高抗原浓度的反应值，则需用正常人血清将样品稀释以后再行检测。
自动化检测试剂及其配套的仪器，可根据储存于仪器中的标准曲线自动计算反应值并自动报告p24抗原的浓度（pg/ml）。 5.5 结果报告和解释
应按照试剂盒说明书报告和解释。
5.5.1 对于定性检测，HIV-1 p24抗原筛查试验有反应的样品必须经过中和试验确证以后才能判断阳性或阴性。
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5.5.2 HIV-1 p24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据。 5.5.3 HIV-1 p24抗原阴性结果不能排除HIV感染。
6 质量控制 6.1 定性检测
酶联免疫吸附试验（ELISA）的内部对照应满足试剂盒规定的条件，还可以使用含有中等浓度p24抗原的质控品（血浆或病毒培养上清液）作为外部对照，按照常规的质控方法绘制质控图。中和试验应使用试剂盒提供的中和抗体，使用已知p24抗原阳性的样品作为阳性对照阳性对照中的中和孔，OD值应下降50%以上。
酶联荧光分析法（ELFA）：每更换批号后或每间隔14天时，必须用试剂盒提供的校准品进行校准，校准值必须在设定的相对荧光值内，若超出范围，必须重新校准。每次校准还需要同时检测试剂盒提供的阴性对照和阳性对照。还可以使用含有中等浓度p24抗原的质控品（血浆或病毒培养上清液）作为外部对照，按照常规的质控方法绘制质控图。中和试验应使用试剂盒提供的中和抗体，使用已知p24抗原阳性的样品作为阳性对照，阳性对照的中和率应大于或等于60%。
电化学发光法(ECLIA)：每更换批号后或每间隔7天或按说明书要求的时间间隔，必须使用试剂盒提供的标准品进行校准，校准值必须满足说明书的要求，还可以使用含有中等浓度p24抗原的质控品（血浆或病毒培养上清液）作为外部对照，按照常规的质控方法绘制质控图。中和试验应使用试剂盒提供的中和抗体，使用已知p24抗原阳性的样品作为
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阳性对照，阳性对照的中和率应大于50%。
抗原抗体快速检测法:检测板表面标记有“检测线1、2”和“质控线”。加入样本前，在结果窗口看不见检测线和质控线的。质控线用于过程的质量控制，出现质控线表示其所在的测试条主要组份活性正常，已正确加入稀释剂。质控线不保证样品已正确加入，也不能作为阳性样品的质控。
6.2 定量检测
绘制标准曲线时， 0.0和125pg/ml二个p24抗原浓度的测定值应符合说明书的要求。
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第五章 HIV核酸检测
1 范围
本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测（病毒载量）的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV-1核酸的定性检测和病毒载量的测定。
2 规范性文件引用
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准 WS -293有效版本。
《艾滋病诊疗指南第三版（2015版）》，中华医学会感染病学分会艾滋病学组。中华临床感染病杂志2015， 08（05）385-401.
卫生部关于印发《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》的通知（卫办医政发?2010]194）。
《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008。
《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南》 （中国疾病预防控制中心，2013。
《HIV-1基因型耐药检测及质量保证指南》（中国疾病预防控制中心，2013）。
Guidelines for the Use of Antiretroviral Agents in HIV-1-Infected Adults and Adolescents。US DHHS 2015 WHO. Recommendationson The Diagnosis of HIVInfection inInfantsand
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Children. World Health Organization 2010.
段星，冯霞，王继宝等，ＨＩＶ抗体检测结果不确定时应用核酸诊断的可行性研究。中国艾滋病性病，２０１４，２０（１１）：815-817。 陈会超，苏莹珍，陈敏等，核酸检测在艾滋病晚期患者诊断中的应用。现代预防医学，2014 ，41 (16)：3025-3027。
李敬云。HIV早期感染诊断方法与应用。传染病信息。2007,20（6）：352-356。
Roche COBAS AmplilPrep/COBAS TaqMan HIV-1 TEST, Procedure Manual,version 2.0.
Biomerieux Nuclisens ? EasyQ HIV-1 Operation Manual, V2.0. Molecular HIV screening.Expert Rev. Mol. Diagn.7：693–705. 2013.
Laboratory Testing for the Diagnosis of HIV Infection, Updated Recommendations , Published June 27, 2014，USA CDC.
Use of laboratory tests and clinical symptoms for identication of primary HIV infection.AIDS 24:941–945，2010.
3 核酸检测的意义 3.1 HIV-1感染诊断 3.1.1 婴儿感染早期诊断
HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。18个月龄以上儿童诊断与成人相同。
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