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天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)
简介：
转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量最高，肝脏次之。AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。
Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，草酰乙酸与NADH经LDH催化生成NAD+，上述方法实际为AST速率法，其反应公式如下：
L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。 草酰乙酸+NADH+H+→L-苹果酸+NAD+。
在上述偶联反应中，NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。对于单试剂比色法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在处吸光度下降速率(-ΔA/min)，下降速率(-ΔA/min)与AST活性呈正比，比色杯光径1.0cm，进而计算酶的活性单位。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成： 编号 名称 TE0135 100T 成分 Tris缓冲液 L-天门冬氨酸 酮戊二酸 NADH LDH 防腐剂 使用说明书 终浓度 100mM 240mM 12mM 0.22mM 2500U/L 15mM 1份 2×50ml 2×100ml 4℃ 避光 TE0135 200T Storage ALT检测液(R)
自备材料：
1、 蒸馏水 2、 比色杯
3、 分光光度计或自动分析仪
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
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① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，
-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个
月有效，用于AST/GOT的检测。
③ (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续
计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。
2、 分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避
免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
3、 生化分析仪检测：按照下表设置主要参数。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用
量或适当稀释后再进行测定。 波长 反应温度 孵育时间 连续监测时间 比色杯光径 系数 待测样品 ALT检测液(R) 340nm 37℃ 90s 60s 1.0cm 3376 15μl 300μl 加入物 AST检测液(R)(μl) 混匀，孵育。 蒸馏水(μl) 待测样品(μl) 45 － － 45 空白管 900 测定管 900 混匀，孵育，各管吸光度变化，计算各管ΔA/min。 计算：
分光光度计计算公式：AST(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(945/45)=ΔA/min×3376 式中：6220=NADH的吸光度
945=反应液的总体积(μl) 45=待测样品体积(μl)
生化分析仪计算公式：AST(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(315/15)=ΔA/min×3376 式中：ΔA/min=测定的340nm吸光度的升高速率
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6220=NADH的吸光度
315=反应液的总体积(μl) 15=待测样品体积(μl)
参考范围：成年健康人血清AST：8-40U/L
性能指标：
空白吸光度值≥1.0 空白测定值≤5U/L 线性范围：0-1000U/L 批内CV<4.0% 批间相对CV<6% 灵敏度：5U/L
注意事项：
1、 抗坏血酸≤30mg/dl，游离胆红素≤40mg/dl，结合胆红素≤40mg/dl，甘油三酯≤
2000mg/dl对测定结果无影响。
2、 如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片，应选择接近的滤光片。 3、 二硝基苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应弃用。
4、 血清中ALT活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。 5、 严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。 6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。打开包装以后，4℃保存一个月。 相关：
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