总糖测定
一、总糖标准曲线的绘制
1.蒽酮配制:取2g蒽酮溶解到体积分数98% H2SO4中,以98%H2SO4定容到1000ml,当日配
制使用。
2.取7支比色管,按下表数据0.1 mg/mL的木糖标准溶液和蒸馏水。
表2木糖标准溶液配制
编号
0(空白对照) 1 2 3 4 5 6
蒸馏水(ml) 2 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.4
木糖标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 1.6
木糖含量(μg) 0 20 40 60 80 120 160
3.在每一支试管中立即加入蒽酮试剂8 mL,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴重新煮沸起,准确煮沸10 min取出,迅速用流动水冷却至室温,在480 nm波长下以2.0 mL蒸馏水代替木糖标准液作为空白,迅速测其余各管吸光值。以标准木糖含量(μg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,作标准曲线。 二、样液总糖测定
吸取待测的溶液2 mL,加入蒽酮试剂8 mL,在100 ℃水浴中放置10 min,用自来水冷却至室温,用相同量的蒸馏水和蒽酮试剂作参比液,在480 nm 处测定吸光度,根据标准曲线计算所测木聚糖中总糖的含量。 三、计算
①总糖(μg)=查曲线所得总糖含量(μg)×(提取液总体积/测定时取用体积) ②总糖=查曲线所得总糖含量(μg)×(提取液总体积/测定时取用体积)/样品质量×100%