、 小肽的测定
1、 原理:利用三氯醋酸作蛋白质沉淀剂,将酶解蛋白粉中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀,并将其中的短链小肽用酸溶解出来,经离心、过滤、消化、蒸馏,测定其蛋白质量。 2、 试剂及仪器: 1) 100ml烧杯; 2) 10ml,25ml移液管; 3) 干过滤装置;
4) 半微量粗蛋白质测定试剂和装置; 5) 15%三氯醋酸溶液(TCA溶液); 6) 4000转/分钟的离心机。
3、 方法:准确称取样品3.6克于100ml烧杯中,加入15%(三氯乙酸)溶液30毫升,混合均匀,静置5分钟。将溶液定量转移,在4000转/分钟下离心10分钟后,取全部上清夜,用干的滤纸过滤,准确移取其滤液10ml于消化管中,按测定粗蛋白质的方法,测定其粗蛋白质含量。同时做空白试剂。 4、 结果:
小肽%(占原样)={(V-V。)×C(HCI)×6.25×0.014×3(30ml÷10ml)}÷m×100% 式中:V---样品消耗HCI的体积,ml; V。---空白消耗HCI的体积,ml; C(HCI)---盐酸的摩尔浓度moN; 6.25×0.014---蛋白质转换系数。 m---称取样品质量,g。
小肽%(占蛋白质)=小肽%(占干基)÷粗蛋白质%×100
重复性:A)每个试样取两个平行进行测定,以其算术平均值为结果; B)允许绝对便差为10%
C)以小肽占粗蛋白质的百分含量上报结果。